天津细胞疗法产品支原体检测NAT法

AdvSHENTEK外源因子全自动核酸检测分析系统凭借优越性能，为支原体检测提供坚实技术支撑。硬件方面，系统温度运行精度≤0.5℃，温度波动控制在 ±0.5℃以内，荧光强度 CV≤3%，确保检测结果的重复性与准确性；4 通道单独运行且支持同步检测，通道可叠加延展，兼顾检测效率与灵活性。软件方面，系统具备三级权限管理、日志审计追踪功能，完全符合 21CFR Part11 法规要求，支持 LIMS 系统连接、USB 数据导出及打印机直接打印，满足企业合规追溯需求。此外，系统运输与储存便捷，仪器可常规运输，检测试剂盒在 2-8℃环境下即可稳定保存，无需特殊冷链条件，进一步提升了产品的实用性与适配性。

质控结果是支原体 NAT 检测可靠性的前提，需严格遵循判定标准，且需结合实验室实际条件验证适配的标准阈值。质控样品的判定规则明确：NTC（无模板对照）的 FAM 信号需 2 复孔 Ct≥40 或无明显扩增曲线，VIC 信号需 2 复孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型扩增；NCS（阴性对照）判定标准与 NTC 一致；PC（阳性质控）的 FAM 信号需 2 复孔 Ct<35 且呈有效 “S” 型扩增，PCS（阳性对照底物）判定标准与 PC 一致。只有质控结果全部满足要求，才能进一步分析样本结果，若质控不达标，需排查设备、试剂、操作等环节的问题并重新检测。

全球主流药典对支原体 NAT 检测的标准菌株选择形成了明确共识，中国、欧洲、美国、日本四国药典一致推荐优先使用猪鼻支原体、口腔支原体、肺炎支原体三种菌株，用于 NAT 方法检测限的验证，这一选择基于支原体的污染发生频率与进化关系。不同地区法规的验证范围略有差异：EP、USP、ChP 要求覆盖特异性、检测限、耐受性，WHO 还需包含半定量与定性实验；部分地区如欧洲药典额外纳入莱氏无胆甾原体、滑液支原体等菌株，针对昆虫和植物来源物料生产场景则需关注螺原体等特殊菌株。合规的标准菌株是 NAT 检测方法验证的前提，其溯源性与授权资质直接影响检测结果的认可度。

取样量的科学设计直接影响支原体检测的代表性与灵敏度，需结合样品总体积、基质特性综合考量。法规建议：产品总体积大于1000mL的按无菌检查法取样，10-1000mL 取总体积的 1%，1-10mL 取 100μL，小于1mL的需采用替代取样方案。实际检测中，取样体积越大，灵敏度越高，但需平衡洗脱液消耗与重复检测需求。此外，支原体兼具胞内胞外生存特性，只检测上清会导致漏检，需采用细胞裂解等处理方式，确保覆盖全部污染靶点，提升检测结果的真实性。

2023 年美国国立卫生研究院（NIH）的对比研究得出一个结论是并非所有商业化支原体检测试剂盒都能满足替代传统方法的要求，研究对市面上 5 款主流试剂盒（ATCC、梅里埃、赛默飞、罗氏、MB）进行测试，发现不同试剂盒对不同支原体菌株的检测灵敏度差异明显，部分产品无法达到宣称的≤10 CFU/mL 检测限（符合欧、日药典替代培养法的要求）。例如，ATCC 试剂盒对莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体的检测限只为 100 CFU/mL，MB 试剂盒对硬蜱螺原体无法检出（>1000 CFU/mL）。这一现象表明，试剂盒的检测性能与支原体菌株特性密切相关，因此企业需根据待测样品的原辅料来源和检测目的，对试剂盒进行严格的性能验证，避免因检测限不达标导致质量风险。

湖州申科生物构建了完整的支原体检测解决方案，包含支原体 DNA 提取纯化试剂盒与检测试剂盒两大产品。提取纯化试剂盒采用磁珠法技术，具有回收率高、样品兼容性强的优势，配合湖州申科 rHCDpurify^®前处理系统可实现自动化提取操作，大幅提升检测效率并减少人为误差。检测试剂盒采用 PCR - 荧光探针法，覆盖近200种支原体 DNA 序列，检测专一性强，且对不同品牌 PCR 仪器具有良好的适用性，性能稳定可靠。产品规格明确，提取试剂盒可处理 50 个样品，检测试剂盒可完成 50 次反应，整套体系从样品前处理到定性检测形成闭环，满足生物制品生产各环节的支原体筛查需求。