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由于细胞可以在体内以依赖 NEO1 的方式同时遇到 RGM 和 NET1,作者探究细胞表面是否存在稳定的三元NEO1-NET1-RGM复合物,或者NET1和RGM是否会竞争结合NEO1。为了探究这两种区别,作者采用Proximity Ligation Assay(***)实验,将经过细胞表达并纯化的全长的NEO1与NETNTR以及全长的胞外RGMB进行相互培养,观察到遇到***现象,并且只有当NET1与RGMB非常接近且距离<40nm时才会产生。当RGMB突变为不可链接NET1时,***现象明显减少。结果表明,NEO1是连接NET1和RGMB所必需的,并且会在细胞表面形成三元复合物。
之前的研究结果表明,RGMB对DCC的结合亲和力比NEO1低约1000倍。在该研究中该研究团队显示在CNs中敲除DCC对RGMA诱导的生长锥塌陷没有影响,也没有影响NET1调节这种效应的能力。DCC缺失不影响NET1介导的神经细胞迁移,也不影响RGMA或RGMB抑制这种作用的能力。这支持RGM抑制可能归因于三元NEO1-NET1-RGM复合物的观点。NEO1与DCC一起的不同进化可以通过信号转导中对三元NEO1-NET1-RGM复合物的需求来解释。该研究团队的研究表明,NET1可以沉默RGMA介导的***系统生长锥塌陷,需要NEO1,RGMA和RGMB抑制NET1对神经细胞迁移的积极作用。NET1介导的神经细胞迁移在体外以剂量依赖性方式被RGMA抑制。这些数据表明NET1和RGMA和RGMB在功能上相互作用,并且它们的同时呈现导致其下游效应的相互沉默,这与三元复合物起到沉默受体信号传导的作用一致。AVT致力服务注射剂行业.
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