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至凝胶约 5 cm 高为止。样品体积少于 10μl 不需灌制积层胶。 4)用另一根已斯德吸管,先从一边的垫片,再从另一边垫片往夹层的液面顶部缓缓加入一层水饱和 C4H10O(厚约 1 cm)。让凝胶在室温聚合 30 min。聚合后,可见在顶层C4H10O与凝胶的界面间有一清晰的折光线,胶的聚合失败往往问题在于过硫酸按或 TEMED,或两者都有。 5)倾去顶层的C4H10O,并以 1×Tris-Cl/SDS, pH8.8 缓冲液冲洗凝胶的顶部表面, 尽量用吸水纸吸干。 6)按表 2 配制积层胶液体,用吸管将液体沿一条垫片加入到玻璃平板夹层,直至夹层的顶部。奉贤区多个适配器可以用于加速wb实验WB实验加速器代理价上海益启生物的同时操作4个WB实验加速询价联系方式。
下压框架并施加真空。等待5-8秒,直到框架完全是空的。9.在连续运行真空的情况下,添加30mL洗涤缓冲液(MultiBlot为15毫升)。重复洗涤步骤3次以上(总共4次洗涤)。当框架完全为空时,将TURN真空关闭。10.在印迹架的表面上涂适量的二抗(对于多印迹,为2.5mL,5毫升用于迷你印迹,或10毫升用于Midi印迹)。在室温下孵育10分钟,然后关闭真空。同样,溶液将被吸收到印迹架中,并且表面可能看起来干燥。重要提示:孵育10分钟后,再抽真空。11.向下压框架并施加真空。
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【操作步骤】 按厂商的使用指南用两块干净的玻璃,平板和 0.75 mm 垫片组装电泳装置中的玻璃平板夹层,并固定在灌胶支架上。 按表 1 配制分离胶液体并脱气,然后加入 10% 的 (NH4)2S2O8 和 TEMED,轻轻搅拌混匀。 按所需分离的蛋白质分子大小选择合适的 C3H5NO 百分比浓度,一般地,5% 的凝胶可用于 60~200kDa 的 SDS 变性蛋白质分子的分离,10% 用于 16~70kDa,15% 用于 12~45kDa。 用一根巴斯德吸管立即将分离胶液体沿夹层中一条垫片的边缘加入于玻璃平板夹层中,离胶,并被筛分而依各自的大小得到分离。上海MerckWB实验加速器WB实验加速器哪家优惠
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