蛋白亲和纯化(无需换液和浓缩)
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
3次低速离心,总耗时~75分钟(含60分钟孵育时间)
1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂(沉降的柱床体积)和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。(柱床)树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。
2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*,其间可温和搅动促进结合。 益启生物公司就带您了解一下 超滤浓缩管的特点。松江区离心浓缩管商家
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的**终浓度不超过
20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,建议的改进方法是:
1)离心力降为推荐离心力的30%-50%
2)改用截留分子量更大的超滤管(如原本选用10k,此时可以选择30k) 3)在浓缩过程中取出超滤管,用***头反复吹吸几次后再继续浓缩
Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况,请先用0.1 N NaOH清洗再离心。***用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。 Merck超滤浓缩管报价上海超滤浓缩管批发商。
Millipore超滤浓缩管设有反转离心回收设计使蛋白样品,特别是小体积样品回收,避免吸头吸取造成的样品丢失或操作错误;
其中0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式样品吸附损失小;
合理的死体积设计,避免样品离干而降低回收率;
能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻松。
有效浓缩同时保证高的蛋白回收率
设计精巧、紧凑,一体化结构确保不会发生渗漏,即使是极为珍贵的样品也能非常放心地操作。
***的化学兼容性
•膜与管壁采用特别的热封工艺,避免使用胶水
带来的化学溶出对样品的污染
•Ultracel® 超滤膜和聚丙烯管材性能稳定,化学
兼容性好
•pH3-10 适用
特别推荐应用(提供实验报告作为参考)
Amicon® Ultra 离心超滤管:
• 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换
• 尿液中蛋白质的浓缩
• 游离标记物的去除
• 抗体的快速浓缩
• 血清多肽生物标志物的纯化
• 双向电泳蛋白样品制备
• 样品去垢剂的去除
操作更安心
•设计精巧、紧凑,一体化结构确保不会发生渗漏,即
使是极为珍贵的样品也能非常放心地操作
•性能稳定,数据平行性、重现性好,适合精细操作和
高通量操作 上海 超滤浓缩管代理销售推荐益启生物公司。
用于搅拌式超滤杯的Ultracel®预切超滤膜片
Ultracel® 再生纤维素膜可以用来对较为稀释的溶液进行脱盐或浓缩。Ultracel® 膜是亲水性的,微观结构紧密,确保对蛋白、核酸等大分子吸附比较低而回收率比较高。
*膜的常规截留分子量分为1, 3, 5, 10, 30及 100 kDa等。
*膜片直径分为25, 44.5, 47, 63.5, 76, 90及150 mm。
对于大体积、高浓度(如蛋白浓度大于 1.0 mg/mL)的样品进行脱盐和浓缩,Biomax®聚苯醚砜(PES)超滤膜是很好的选择。血清、血浆或条件组织培养基等,都是 Biomax®超滤膜适合处理的样品。
*膜的常规截留分子量为5,10,30, 50, 100, 300和500kDa等。
*膜直径分为25,44.5,47,63.5和76mm。 一个好的 超滤浓缩管代理销售需要具备哪些特点您知道吗?静安区浓缩管批发
对于不同的需求我们选择不同的 超滤浓缩管系列。松江区离心浓缩管商家
外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。
超滤方法纯化具体操作步骤举例
Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)
用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。
从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)
注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 * 松江区离心浓缩管商家
上海益启生物科技有限公司致力于化工,是一家贸易型公司。益启生物致力于为客户提供良好的试剂,耗材,科研试剂,仪器设备,一切以用户需求为中心,深受广大客户的欢迎。公司将不断增强企业重点竞争力,努力学习行业知识,遵守行业规范,植根于化工行业的发展。益启生物秉承“客户为尊、服务为荣、创意为先、技术为实”的经营理念,全力打造公司的重点竞争力。