生物制品宿主细胞蛋白（HCP）残留检测

由于宿主细胞蛋白（HCP）残留检测试剂盒关键组分（校准品、检测抗体）存在固有且明显的变异度，不同试剂盒对同一样本的检测结果，不仅可能在数值上出现较大差距，在特定 HCP（如低丰度或高风险 HCP）的检出能力上，也可能存在明显偏差，这对生物制品 HCP 残留的准确管控构成挑战。因此，为确保检测结果能真实反映自身产品的 HCP 残留状况，企业必须结合自身产品特性（如宿主细胞类型、目标产物属性）与生产工艺特点，对不同品牌、不同类型的试剂盒开展系统且详细的平行比对实验。同时，还需进行针对性的适用性评估，验证试剂盒对自身产品的检测准确性、特异性及稳定性，再筛选出与自身产品匹配度适合的检测方案，为生物制品的 HCP 残留控制提供可靠技术支撑，保障产品质量与用药安全。

宿主细胞残留蛋白（HCP）检测是生物制品质量控制的关键环节，当前主流技术为基于抗体的免疫学方法（如 ELISA）。但实际检测中，不同试剂盒的结果常存在明显偏差，关键问题源于其两大关键组分 ——HCP 校准品与检测抗体 —— 在制备及表征上的高度可变性。作为定量基准的校准品，自身复杂性极高。不同供应商制备时，所用细胞来源、培养及表达条件存在明显差异，且宿主蛋白的提取纯化工艺（如目标产物去除策略）也各不相同，这些差异直接导致校准品的组成、对实际样品的代表性及储存稳定性千差万别。检测抗体（尤其是多克隆抗体）需通过免疫动物获得，其特异性与 HCP 覆盖度受多重因素影响：免疫原的选择、动物个体免疫应答差异、免疫方案设计，以及后续抗体筛选与纯化流程，都会让不同批次或来源的抗体，在对不同 HCP 的亲和力、对低丰度蛋白的检测灵敏度等识别谱特性上，形成本质区别。

宿主细胞蛋白残留检测中，抗体覆盖率评估实验的操作难度较高，需在实验方法建立阶段对关键步骤开展充分验证，以确保实验方法具备稳健性。湖州申科研发的磁珠捕获式 IMBS 技术（immunomagnetic beads separation，免疫磁珠分离），在开发过程中已对关键步骤进行充分验证，相关验证结果已通过专业评审，具体验证内容（部分）如下：① 方法优化：围绕磁珠与抗体的偶联比例、洗涤液体积、洗涤次数、洗脱次数等关键参数开展优化验证，确保方法稳健性；② 过程质控：二维电泳存在实验步骤繁琐、时间跨度大、中间环节难把控等问题，因此在等电聚焦实验环节引入荧光标记多肽，可快速判定等电聚焦效果；同时在 SDS-PAGE 电泳两侧增设 40 ng 银染质控样品，用于控制银染显色过程；③ 方法重复性：针对 2D 分析与 LC-MS 分析开展重复性验证，其中 2D 分析方法的重复性可达 80% 以上，LC-MS 分析方法的重复性可达 90% 以上；④ 上样量优化：针对 2D 分析与 LC-MS 分析实施上样量验证，规避上样量差异对检测结果的影响；⑤ 假阳性排查：排查样品与阴性抗体间是否存在非特异性结合，确认 IMBS 实验设定的步骤与参数是否会导致假阳性结果。

湖州申科生物在宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 检测技术领域具备扎实的技术积累，已搭建起高质量、全流程的自主开发平台，覆盖 HCP 检测试剂盒研发的关键环节：①抗原表征与制备：依托合规平台具备 HCP Reference/Antigen 制备能力，借助 2D 凝胶电泳等先进技术保障抗原库的代表性；②动物免疫与抗体制备：凭借自有免疫动物平台，把控免疫原设计及动物免疫过程，产出高特异性、广覆盖度的抗体；③体系开发与验证：依靠成熟技术经验开发高灵敏度、高稳定性的检测体系，并严格遵循 GMP 标准完成方法学验证。该平台通过全流程自主可控的技术整合，从源头保障试剂盒性能的一致性与可靠性，大幅降低不同批次试剂盒的检测变异性。其研发的 HCP ELISA 试剂盒已服务国内外 200 余家生物医药企业，为单抗、疫苗等生物制品的工艺开发、质量控制及 IND/BLA 等法规申报，提供符合监管标准的定制化检测方案。

湖州申科生物依据不同宿主的实际生产工艺，借助高质量免疫原与HCP多抗的标准化制备流程，制备出高效价、高覆盖率的抗体，进而开发出SHENTEK^®HCP检测试剂盒：适配大肠杆菌表达菌（BL21）生产工艺及克隆菌碱裂法提取质粒工艺，以及适配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、毕赤酵母等不同宿主，可用于中间品、原液及终产品的HCP定量监测。为保障ELISA法对HCP定量检测的准确性，需对HCP抗体覆盖率开展验证。湖州申科的抗体覆盖率平台，采用2D Clean-up试剂盒去除蛋白样品中的干扰物（如洗涤剂、盐、脂质、酚类、核酸等离子污染物），同时设置2D质控标准品实施严格质控，并以阴性抗体作为对照开展平行试验，以此提升结果准确度。

宿主细胞蛋白（HCP）ELISA 定制化开发平台需具备完善的开发体系、可靠的技术平台与专业的开发团队，以此实现长期稳定供应符合法规要求的试剂盒。其中，校准品作为关键原材料，其良好的稳定性与溯源保障对试剂盒生命周期至关重要。为确保校准品稳定，通常采用冻干工艺制备，通过单因素方差分析方法评估其均一性，并依据法规规定的蛋白定量方法为校准品赋值，同时溯源至国家标准品（如有）或 BSA 国家标准品，从源头保障检测的准确性与合规性，为后续检测体系的可靠运行奠定基础。