北京重组蛋白用宿主细胞蛋白（HCP）残留检测抗体覆盖率验证

LC-MS/MS 作为成熟稳定的蛋白质组学分析技术，依托超高分辨率与准确度，在生物分析领域中占据关键地位。该技术不仅可对低含量宿主细胞残留蛋白（HCP）开展定性检测，还能通过构建专属蛋白质谱库准确鉴定 HCP 的具体种类，为深度解析残留蛋白组成提供重要支撑。不过该技术应用中面临的主要挑战，是如何优化 LC-MS 方法以契合 GMP 规范对产品放行检测的严苛要求。在质谱检测环节，引入表征明确的内标与外标蛋白，可准确分析 HCPs 的整体组成，并有效识别其中具有潜在风险的高风险蛋白。这一技术手段不仅为开发产品专属 HCP ELISA 检测方法提供有力数据支撑，还可助力工艺优化升级，加快推进生物制品从研发到获批上市的全流程进度。

SHENTEK^®AbunProteoX 是以磁珠为基础构建的亲和配体，适用于多种生物制品样本。其操作流程经精心设计，简化高效，方便用户操作。与传统非变性酶解方法相比，AbunProteoX 能有效提升 HCP 的检出效果，有效降低质谱分析的检测下限，使低丰度蛋白得以有效检出，保障了检测的高灵敏度。即便存在高丰度目标蛋白时，经 AbunProteoX 处理后，仍能有效分析宿主细胞蛋白（HCPs），为生物制品中宿主细胞蛋白残留控制提供了简便、易用且高效的样品处理工具。

由于 HCPs 属于复杂的多分析物，为制备覆盖率尽可能高的抗体（以覆盖工艺特有的高风险 HCPs），需采用可靠的免疫策略。获得符合性能要求的抗体后，需借助经过验证的 2D 或 LC-MS 方法对抗体覆盖率进行表征，确保抗体可充分覆盖各实际工艺下产生的 HCPs。在拥有代表性抗原与优良性能抗体的基础上，开展 ELISA 检测体系开发，涵盖原辅料筛选与制备研究、各组分工艺及反应体系研究、稳定性研究等重要内容。检测体系开发完成后，需依据 ICH 及药典要求开展分析方法验证评估，确保体系的线性、范围、检测限、定量限、准确度、精密度、专属性及耐用性均满足法规要求。

大肠杆菌具有遗传背景明确、便于培养与调控、蛋白表达量高、成本低廉且培养周期短等特点，是性价比高的蛋白表达系统。其中，K-12系列与B系列菌株是工业级生物工程中常用的大肠杆菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大规模生产质粒DNA，进而制备细胞基因治疗产品与病毒载体类疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更适合高效转染表达载体及常规蛋白的表达，例如病毒蛋白、重组蛋白疫苗、细胞因子、酶类等产品。湖州申科生物依据这两种菌株的特性，分别研发了大肠杆菌表达菌HCP残留检测试剂盒与大肠杆菌克隆菌碱裂HCP残留检测试剂盒。

湖州申科生物依据不同宿主的实际生产工艺，借助高质量免疫原与HCP多抗的标准化制备流程，制备出高效价、高覆盖率的抗体，进而开发出SHENTEK^®HCP检测试剂盒：适配大肠杆菌表达菌（BL21）生产工艺及克隆菌碱裂法提取质粒工艺，以及适配CHO、MDCK、HEK293、Sf9、VERO、毕赤酵母等不同宿主，可用于中间品、原液及终产品的HCP定量监测。为保障ELISA法对HCP定量检测的准确性，需对HCP抗体覆盖率开展验证。湖州申科的抗体覆盖率平台，采用2D Clean-up试剂盒去除蛋白样品中的干扰物（如洗涤剂、盐、脂质、酚类、核酸等离子污染物），同时设置2D质控标准品实施严格质控，并以阴性抗体作为对照开展平行试验，以此提升结果准确度。

方法选择是影响宿主细胞蛋白（HCP）残留检测结果的因素之一。酶联免疫吸附法（ELISA）与液相色谱 - 质谱联用技术（LC-MS），是当前 HCP 检测领域的两类常用方法。据文献统计，当前在总 HCP 定量检测中，ELISA 仍为主流技术；而 MS 法可用于特定蛋白（如高风险蛋白）的鉴定与定量，已成为重要的互补手段。此外，检测过程中所用试剂与耗材的质量，会直接影响检测结果的准确性。质量不达标的试剂，可能引发检测结果出现假阳性或假阴性。举例来说，若抗体的特异性与亲和力不足，可能在 ELISA 检测中产生交叉反应；若抗原代表性不足或抗体覆盖率偏低，则可能造成漏检；而稀释液抗干扰能力较弱时，也会对检测准确性产生影响。相关案例研究显示，采用定制化方法替代原有商业化试剂盒后，抗原代表性与抗体覆盖率明显提升，HCP 检测值也呈现整体升高的趋势。