北京细菌内毒素检测

内毒素检测中，样品中的蛋白质或酶的修饰作用易破坏鲎试剂的反应体系，导致检测结果失真。鲎试剂检测内毒素的本质是一系列丝氨酸蛋白酶的酶促放大过程，若样品中存在氧化剂、抗氧化剂、蛋白水解剂或专一失活剂，会直接灭活反应所需的酶；而乙醇、苯酚等物质则会导致蛋白质变性，同样抑制反应进程。例如，某些生物制品中含有的蛋白水解酶，可能提前降解鲎试剂中的蛋白酶，使内毒素无法被正常检测。为消除这类干扰，需优先限制样品中抑制物的含量：可采用内毒素检查用水稀释样品，降低抑制物浓度；对耐热的抑制物（如部分蛋白水解酶），可通过加热灭活处理（如 56℃孵育 30 分钟）破坏其活性；若样品基质复杂，还可使用超滤技术分离内毒素与干扰蛋白质，避免修饰作用对酶促反应的影响，保障内毒素检测结果的可靠性。

内毒素检测重组级联试剂（rCR）与天然鲎试剂在原料、性能和可持续性上存在本质区别。原料方面，天然鲎试剂依赖鲎血采集，受动物资源限制，而 rCR 通过基因工程表达 C、B 因子及凝固酶原，无动物源性，供应稳定。特异性上，天然鲎试剂因含 G 因子，易与 β-D 葡聚糖反应产生假阳性，而 rCR 剔除 G 因子，只对内毒素特异性响应，从机制上消除干扰。批间一致性方面，天然鲎试剂受鲎个体差异影响，批间 CV 值较高；rCR 成分明确且生产工艺标准化，批间差异明显降低，CV 值≤15%。两者灵敏度相当（0.005EU/mL），但 rCR 无需面临鲎资源政策限制，更符合动物福利趋势和长期质控需求，是天然鲎试剂的理想替代。

重组级联试剂作为内毒素检测鲎试剂的理想替代方案，其具备的优势有：①优化的G因子级联反应，无G因子旁路干扰。采用基因重组技术表达鲎血细胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），无G因子旁路干扰，排除1，3-β-D葡聚糖假阳性风险。②依然采用动态显色法原理，可沿用天然鲎试剂检测设备。重组级联试剂（rCR）,与天然鲎（动态显色法）具有相同的操作流程、检测设备、分析方法，用户可以沿用天然鲎的仪器、软件、耗材、人员培训、验收程序等，无需投入额外成本。③具有与天然鲎的相同反应机制，检测结果具有等效性。完全模拟了天然鲎试剂的酶联反应，由3种蛋白组成的级联反应机制提供了信号放大的过程，确保了检测的准确性和灵敏度。湖州申科按照药典要求进行替代方法验证，无缝衔接技术转移，助力用户从方法验证到工艺落地，从数据合规到全球申报。

随着动物保护理念和法规要求升级，重组因子C法（rFC法）作为 LAL 法的替代技术逐渐普及。重组 C 因子是以基因重组的方式表达的 LAL 试剂中的 C 因子，C 因子被内毒素活化后切割荧光底物产生游离荧光基团，通过检测荧光信号可以反应活化后的蛋白酶活性，并由此可以推算出内毒素的含量。与传统 LAL 法相比，rFC 法无需依赖鲎血资源，避免了天然 LAL 试剂批间差异大、易受 β- 葡聚糖干扰等问题，且反应特异性更强。目前，《美国药典》、《欧洲药典》等法规已收录 rFC 法，欧盟更推荐其用于疫苗等高风险产品检测，在保证检测准确性的同时，符合动物福利和可持续发展要求。

湖州申科生物动态显色法鲎试剂用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样本中的细菌内毒素的含量。 细菌内毒素能特异性地活化反应主剂中的 C 因子，活化的 C 因子活化 B 因子，活化的 B 因子进而活化凝固酶原，凝固酶水解反应中的显色底物，产生游离的pNA（对硝基苯胺）从而引起吸光度变化，根据动态检测溶液吸光度变化率对内毒素进行定量。本品能够快速、高灵敏度地定量检测样品中的内毒素水平，适用于各种实验室和工业生产场景，确保产品质量和安全性。

湖州申科重组级联试剂（rCR）在关键性能指标上表现优异，满足内毒素检测的严苛要求。灵敏度方面，其检测范围覆盖 0.005-5EU/mL，可准确捕捉微量内毒素残留，适配基因治疗、血液制品等低限值需求场景。标准曲线线性良好，R²≥0.990，确保定量结果的准确性。反应效率上，rCR 只需 60 分钟即可完成检测，较部分竞品的 90-120 分钟大幅缩短，提升检测周转效率。抗干扰性实验显示，对细胞培养辅料、300g/L 葡萄糖、FBS 血清、单抗等 8 类复杂样品，rCR 在较低稀释倍数下加标回收率可达 70%-175.4%，优于重组 C 因子法。批间一致性方面，多批次试剂检测同一样品的 CV 值≤15%，稳定性远超行业平均水平，为长期质控提供可靠保障。