HEK293宿主细胞蛋白（HCP）残留检测高风险蛋白

毕赤酵母（Pichia pastoris）是第二代酵母表达系统中的代表性菌株，是美国FDA认定的GRAS（Generally Recognized As Safe）微生物，具有表达水平高，产物活性好，培养成本低，易扩大为工业化生产等特点。在生物制药领域，酶制剂、胰岛素、表皮生长因子、胶原蛋白等多种生物制剂已经通过毕赤酵母系统进行商业化生产。与其他产品杂质一样，毕赤酵母宿主残留蛋白（HCP）可能对生物制品的安全性和有效性产生不利影响，因此在生产监测、产品放行等过程中需要对其进行定量研究并进行严格控制。SHENTEK^®毕赤酵母HCP残留检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法）是湖州申科生物自主研发、具有完全自主知识产权的、实现关键试剂全国产化的毕赤酵母HCP通用检测试剂盒。本试剂盒适用于基于GS115、X33等在内的毕赤酵母菌株生产的生物制品中宿主残留蛋白的定量检测，操作步骤少、快速，检测专一性强，性能稳定可靠。

大肠埃希氏菌(Escherichia coli，E. coli )又称大肠杆菌，其作为模式微生物被广泛应用于生命科学研究中。大肠杆菌是表达药用异源蛋白的常用微生物，在被批准的药用蛋白中，大约30%的产品以大肠杆菌作为表达宿主菌。与其他表达平台一样，尽管下游复杂的纯化步骤已经去除了大量的杂质，但终产品中仍会存在HCP残留风险，必须对其进行质量控制，使其符合放行标准。湖州申科生物E.coli表达菌HCP残留检测试剂盒用于大肠杆菌表达菌株BL21来源的宿主细胞蛋白定量检测，适用于重组蛋白类产品的工艺中间品和原液类样品，如白细胞介素（IL）、干扰素（rhIFN）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、肿瘤坏死因子（rhTNF）、促生长因子（EGF/FGF/PDGF）等。试剂盒检测步骤少，快速，专一性强，性能稳定可靠。

宿主细胞残留蛋白（HCP）检测是生物制品质量控制的关键环节，采用基于抗体的免疫学方法（如ELISA）。然而，不同试剂盒之间的检测结果常存在明显差异，关键原因在于其依赖的关键组分——HCP校准品和检测抗体——本身制备与表征的高度可变性。校准品作为定量的基准，其复杂性极大。不同供应商在制备时使用的细胞来源、培养及表达条件、宿主蛋白提取纯化工艺（例如目标产物去除策略）差异明显，导致校准品的组成、代表性及稳定性各不相同。同样，检测抗体（尤其是多抗）通过免疫动物获得，其特异性与覆盖度受免疫原、动物应答个体差异、免疫方案及后续抗体筛选/纯化过程的影响巨大，不同批次或来源抗体的识别谱（如对不同HCP的亲和力、对低丰度蛋白的灵敏度）存在本质差别。正是这些关键组分固有的明显变异度，导致不同试剂盒对同一样本的检测结果在数值上、甚至特定HCP的检出能力上可能出现较大偏差。因此，为确保检测结果真实反映自身产品的HCP残留情况，企业应结合自身产品特性和工艺，对不同试剂盒进行详细的平行比对与适用性评估，以筛选出匹配度较高的检测方案。

湖州申科生物依托高分辨质谱技术推出宿主细胞蛋白定制化检测服务组合，覆盖生物制品残留蛋白分析需求。该平台提供四类服务：HCP蛋白检测定制化服务；通过ELISA、双向电泳（2D）及LC-MS/MS技术，支持常规生物制品检测、高危及工艺相关蛋白数据库构建以及特殊生物制品分析；抗体覆盖率服务采用自主研发的IMBS技术结合质谱，准确评估ELISA试剂盒对工程细胞HCP的捕获能力，并完成校准品表征；靶向HCP检测专注于高风险残留蛋白的方法开发；同时提供蛋白种属鉴定服务，利用LC-MS技术溯源样品中的物种特异性肽段。该服务体系通过多技术联用与深度定制化策略，满足从基础筛查到工艺关键杂质监控的全维度需求。

磷脂酶B样蛋白2（Phospholipase B-Like 2，PLBL2/PLBD2），因其强共纯化能力、强免疫原性和潜在的酶活性，被认为是CHO HCP的关键高风险因子之一。目前行业建议，需要开发特定的检测方法对这些已知蛋白或特定蛋白进行监控以更好地把控其潜在风险。SHENTEK^® CHO PLBL-2残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法）是湖州申科生物自主研发的、具有完全自主知识产权的CHO PLBL-2蛋白通用检测试剂盒。本试剂盒适用于基于CHO表达系统的生物制品中CHO HCP高风险蛋白PLBL-2的定量检测。本试剂盒操作步骤少，快速，检测专一性强，性能稳定可靠。

按照美国药典1132章节的要求，HCPs校准品需满足代表性要求，即能覆盖实际工艺产品生产中的HCPs。从HCP免疫检测方法使用目的和预期风险管理要求考虑，满足工艺开发和验证，同时为了应对下游工艺中潜在的异常工艺失效，或工艺变更需求，建议采用上游发酵工艺末端，如澄清处理后工艺点的样本作为HCPs的来源。在实际制备中，可采用空细胞或空载细胞在模拟实际工艺的预定条件进行采集，通过二维电泳或高分辨率质谱等蛋白质组学方法进行模拟工艺和实际工艺下HCPs的代表性表征分析。越靠近下游HCPs蛋白种类越少，也越接近DS中HCPs，但是其可能无法满足工艺开发和验证需求，也无法保证工艺的潜在风险，往往不推荐使用，或只作为上游工艺HCPs免疫检测法的辅助使用。