宿主细胞蛋白残留检测抗体覆盖率评估实验操作复杂,需要在建立实验方法阶段对关键步骤进行充分的验证,以证明实验方法的稳健性。湖州申科开发的基于磁珠捕获的IMBS方法(immunomagnetic beads separation),在开发过程中对关键步骤进行了充分验证,相关结果经过专业评审,验证的内容如下(部分):①方法优化:针对磁珠与抗体的偶联比例、洗涤液体积、洗涤次数、洗脱次数等关键参数进行优化验证,以保证方法的稳健性;②过程质控:二维电泳存在实验步骤多,时间跨度长,中间步骤难以控制等缺陷,因此在等电聚焦实验部分设计了荧光标记多肽,可快速判断等电聚焦效果。在SDS-PAGE电泳的两侧增加40 ng银染质控,用于银染显色的控制;③方法重复性:针对2D分析以及LC-MS分析进行重复性确认,其中2D分析方法重复性可达到80%以上,LC-MS分析方法可到90%以上;④上样量优化:针对2D分析以及LC-MS分析进行上样量确认,消除上样量差异对检测结果带来的影响;⑤假阳性:排除样品与阴性抗体之间是否存在非特异性结合,确定IMBS实验所设定的步骤、参数是否有假阳性结果存在。
HCP 定制化开发需构建成熟平台、技术实力、合规体系、稳定供应、专业团队及成功案例的全维度支撑体系。广东宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒
湖州申科生物参考USP通则<1132.1>阐述的内容,依托公司深耕生物制品质量控制领域十余年经验,针对LC-MS检测HCPs方法进行了评价与优化。同时通过对LC-MS检测HCPs整体流程建立完整的质控,建立起一套抗干扰能力强、稳定性好、准确度高、结果真实可靠的LC-MS检测HCPs标准方法。检测技术平台分成样品制备、质谱检测、数据生信分析及质谱结果方法验证四部分,已使用LC-MS平台进行了293T、不同工艺E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程细胞HCPs抗体覆盖率的检测分析。
HEK293宿主细胞蛋白(HCP)残留检测方法开发不同 HCP 试剂盒检测结果有差异,企业要评估筛选合适方案。
大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E. coli )又称大肠杆菌,其作为模式微生物被广泛应用于生命科学研究中。大肠杆菌是表达药用异源蛋白的常用微生物,在被批准的药用蛋白中,大约30%的产品以大肠杆菌作为表达宿主菌。与其他表达平台一样,尽管下游复杂的纯化步骤已经去除了大量的杂质,但终产品中仍会存在HCP残留风险,必须对其进行质量控制,使其符合放行标准。湖州申科生物E.coli表达菌HCP残留检测试剂盒用于大肠杆菌表达菌株BL21来源的宿主细胞蛋白定量检测,适用于重组蛋白类产品的工艺中间品和原液类样品,如白细胞介素(IL)、干扰素(rhIFN)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、肿瘤坏死因子(rhTNF)、促生长因子(EGF/FGF/PDGF)等。试剂盒检测步骤少,快速,专一性强,性能稳定可靠。
湖州申科生物CHO-K1 HCP 残留检测试剂盒(一步酶联免疫吸附法)基于固相酶联免疫吸附分析法,适用于基于CHO-K1细胞生产的生物制品中宿主残留蛋白的定量检测。该分析方法通过在预包被抗CHO-K1HCPs绵羊多抗的酶标板中加入校准品或待测样品、HRP标记的抗CHO-K1HCPs绵羊多抗进行共孵育。洗涤后,加入TMB底物进行显色反应,再使用终止液终止酶催化反应。利用酶标仪在450nm波长下测读吸光度,其吸光度与校准品或待测样品中的HCPs浓度成正相关,通过校准品拟合的剂量-反应曲线即可计算得出待测样品中HCPs的浓度。本试剂盒对待测样品无需进行特殊处理,只需通过合适的稀释比例进行适用性验证即可直接使用。本试剂盒操作步骤少,快速,检测专一性强,性能稳定可靠。
工艺特异型、平台型、通用型HCP检测试剂盒各有特点,满足不同需求。
宿主细胞蛋白残留检测抗体覆盖率评估:法规推荐的方法有两大类:一类是传统2D-WB法,另一类是基于抗体亲和的免疫捕获类方法。传统2D-WB法存在需要蛋白变性,样品需要前处理(破坏蛋白天然表位);转膜效率低;易产生非特异性等缺陷,难以反映真实的覆盖率水平。湖州申科自主开发了免疫磁珠捕获分离技术(immunomagnetic beads separation,IMBS),利用免疫磁珠的半液态性质,可以在悬浮的条件下与HCP样本充分混匀结合,整个过程蛋白无需变性,结合方式与ELISA检测条件相似,可以获得更真实的覆盖率结果。
宿主检测方法替换需桥接验证,确保新旧方法结果一致性与可比性。CHO宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒开发要求
SHENTEK® AutoElisa-4K HCP 检测自动化系统可减少人为误差,满足 21 CFR Part 11 数据管理要求。广东宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒
湖州申科在宿主细胞蛋白(HCP)ELISA检测技术领域拥有深厚的积累,已成功构建高质量、全流程的自有开发平台,覆盖HCP检测试剂盒研发的关键环节:①抗原表征与制备:基于合规平台的HCP Reference/Antigen制备能力,采用2D凝胶电泳等先进技术确保抗原库的代表性。②动物免疫与抗体制备:依托自有免疫动物平台,控制免疫原设计与动物免疫过程,产出高特异性、广覆盖度的抗体。③体系开发与验证:凭借成熟的技术经验开发高灵敏度、高稳定性的检测体系,并严格遵循GMP标准完成方法学验证。该平台通过全流程自主可控的技术整合,从源头保证试剂盒性能的一致性与可靠性,明显降低不同批次试剂盒的检测变异性。其研发的HCP ELISA试剂盒已成功服务于国内外200余家生物医药企业,为生物制品(如单抗、疫苗)的工艺开发、质量控制及法规申报(如IND/BLA)提供符合监管要求的定制化检测解决方案。
广东宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒