荧光定量 PCR 仪的检测结果会受到多种因素的影响,包括仪器设备、试剂质量、样本处理以及实验操作等方面,以下是具体介绍:引物和探针:引物和探针的特异性、纯度及浓度对检测结果影响明显。若引物特异性不好,可能会与非目标序列结合,产生非特异性扩增,干扰目标基因的定量。探针的质量和标记效率也会影响荧光信号的强度和稳定性,进而影响检测的准确性。酶的活性:Taq 酶等聚合酶的活性和稳定性是保证 PCR 反应顺利进行的关键。酶活性过低会导致扩增效率低下,产量不足;而酶的稳定性差可能在反应过程中失活,使扩增反应中断,影响结果的重复性和准确性。反应缓冲液:反应缓冲液的成分和 pH 值等条件对 PCR 反应有重要影响。不合适的缓冲液条件可能影响酶的活性、引物与模板的结合以及 DNA 的稳定性,从而导致扩增效果不佳,检测结果不准确。染料的纯度、荧光量子产率及与核酸的结合特性等很重要。徐州YELLOW荧光定量PCR仪直销价

你可能想说的是 “实时荧光定量 PCR 仪”。实时荧光定量 PCR 仪是一种用于对核酸进行定量分析的仪器,在医学、生物学等领域有着广泛的应用。工作原理实时荧光定量 PCR 仪基于 PCR 技术,在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析。例如,常用的 SYBR Green I 染料,在游离状态下荧光微弱,与双链 DNA 结合后荧光明显增强,随着 PCR 产物的合成,荧光信号不断增加,仪器可实时检测到这种变化。南京VIC荧光定量PCR仪品牌排行TET 荧光染料常被用于荧光定量 PCR 实验,它可以与其他荧光染料如 FAM、VIC 等一起;

实时荧光定量 PCR 仪在多个领域都有广泛的应用,以下是一些主要的应用领域:疾病诊断:可对病毒、细菌等病原体的核酸进行检测,如、病毒、结核杆菌等,实现疾病的早期诊断。例如,在期间,实时荧光定量 PCR 仪是检测核酸的重要工具,通过检测患者样本中病毒的核酸量,判断是否以及的程度。疾病监测:对于一些慢性疾病,如、心血管疾病等,实时荧光定量 PCR 仪可监测相关基因的变化,辅助医生了解疾病的发展进程、效果以及预测疾病的复发风险。例如,通过检测患者体内特定基因突变的频率和拷贝数,评估的恶性程度和后的残留情况。药物研发:在药物研发过程中,可用于研究药物对基因表达的影响,筛选具有潜在作用的药物靶点。同时,还可监测药物过程中患者体内基因的变化,为个体化提供依据。例如,通过检测患者在使用某种药物前后肿瘤细胞中相关基因的表达水平,判断药物是否有效,并调整方案。
ROX原理:主要用于荧光定量 PCR 中的校正和归一化。在反应体系中,ROX 的荧光强度相对稳定,不受 PCR 反应过程的影响。通过检测 ROX 的荧光信号,可以对其他荧光染料的信号进行校正,消除由于加样误差、反应体积差异、仪器波动等因素引起的荧光信号变化,提高定量结果的准确性和可靠性。特点:激发波长约为 570nm,发射波长约为 590nm,荧光颜色为红色。ROX 通常与其他荧光染料如 FAM、VIC 等配合使用,在多重荧光定量 PCR 中,为每个反应孔提供一个稳定的内参荧光信号,以便对不同孔之间的荧光信号进行标准化处理。检测微生物的特异性核酸序列,实现对食品中微生物的定量分析,及时发现食品中的微生物污染问题。

TAMRA(四甲基罗丹明)常作为荧光共振能量转移(FRET)中的淬灭基团与其他荧光基团搭配使用,如与 FAM 等供体染料配合。当供体染料被激发时,能量会转移到 TAMRA 上并以非荧光形式耗散,从而实现对荧光信号的调控。在荧光定量 PCR 中,常利用这种能量转移机制来检测 PCR 产物的生成。例如,在 TaqMan 探针中,FAM 标记在探针的 5' 端,TAMRA 标记在 3' 端,当探针完整时,FAM 的荧光被 TAMRA 淬灭;而在 PCR 延伸过程中,Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性会将探针水解,使 FAM 与 TAMRA 分离,FAM 荧光恢复,从而实现对 PCR 产物的定量检测。特点:激发波长约为 550nm,发射波长约为 580nm,荧光颜色为红色。TAMRA 具有较好的光稳定性和较高的量子产率,能够产生较强的荧光信号,并且与许多常用的荧光基团具有良好的光谱兼容性,适用于多种荧光检测平台。与核酸结合特异性强、稳定性好的染料,可减少非特异性信号干扰。HEX荧光定量PCR仪厂家
纯度高、量子产率高的染料能产生更强荧光信号;徐州YELLOW荧光定量PCR仪直销价
荧光定量 PCR 仪的检测结果会受到多种因素的影响,包括仪器设备、试剂质量、样本处理以及实验操作等方面,。加样准确性:在配制反应体系和加样过程中,移液器的使用不准确会导致试剂和样本的加入量出现偏差。例如,加样量过多或过少都会影响反应体系中各成分的浓度,进而影响扩增效率和检测结果的准确性。反应体系配制:反应体系中各成分的比例要准确配制。如果引物、探针、酶、dNTP 等成分的浓度过高或过低,都会影响 PCR 反应的特异性和效率,导致检测结果不准确。此外,反应体系中若存在气泡,可能会影响热传递和荧光信号的检测。实验环境:实验环境的温度、湿度等条件也会对实验结果产生影响。例如,环境温度过高或过低可能影响酶的活性和反应速率,湿度较大可能导致试剂吸潮变质,从而影响检测结果的稳定性和准确性。徐州YELLOW荧光定量PCR仪直销价