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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体:唾液酸是带负电荷的糖残基,存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化,从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. 样品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法,可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。ImpaRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供,装在 2000 单位小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。浙江用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶

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Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用:O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率(图3)。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽,而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR (1) 具有更具选择性的氨基酸序列偏好,此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外,ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解,如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品(T184-S199和T200-H204;图2b和d),而在ImpaRATOR消化的样品中,具有漏裂的相应肽(S184-H204)的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率,但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构,包括唾液酸化物种。例如,条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较,在OpeRATOR中,必须去除唾液酸才能产生酶活性,这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之,ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。湖北冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究在天然条件下用固定化PNGase F去除zhiliao性抗体;

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与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗体、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于减少异质性,以促进蛋白质的分析,例如质谱法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-连接聚糖的快速高效去糖基化;即用型离心柱形式 - 无酶干扰分析;与LC-MS兼容。与PNGase F类似,Genvois的与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常见的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即单唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下组分:PNGase F;O-糖苷酶。

蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性,因此需要在开发和生产过程中进行表征和监测。常见的聚糖分析工作流程是用PNGase F释放N-聚糖,然后用荧光标记物(如2-AB、2-AA、普鲁卡因胺或RapiFluor-MS™(沃特世公司))标记生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛细管电泳分离标记的聚糖,以表征和定量不同的聚糖结构。 在这里,使用游离聚糖方法分析zhiliao性抗体曲妥珠单抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠单抗和依那西普在天然条件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小时,而RNase B需要变性和还原才能完全去糖基化。因此,在50°C下用PNGase F去糖基化10分钟之前,用RapiGest™ SF表面活性剂(沃特世公司)和TCEP处理RNase B。 用RapiFluor-MS标记所得游离的聚糖,并通过HILIC UPLC-FLD-MS进行分析。SialEXO 2-3唾液酸酶,对 α2-3连接的唾液酸靶向水解。

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用于离心柱中糖蛋白去胶基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的FucosEXO酶,用于糖蛋白的去氟糖基化,而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去胶基化。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. z终样品中不含酶。有效去除α1-2,3,4连接岩藻糖:分析用复杂聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶学工具。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 连接的岩藻糖残基,无需辅助因子或添加从而实现 O-糖谱分析、位点占用测定和 O-糖肽图谱以及使用 LC-MS 分析的中级方法。湖北冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

ImpaRATOR 是一种 O-糖依赖性蛋白酶,可消化携带粘蛋白型O-聚糖的蛋白。浙江用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶

OglyZOR 来源于口腔链球菌,在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 227 kDa。SialEXO来源于Akkermansia muciniphila,在大肠杆菌中表达。SialEXO酶含有His标签,组分的分子量分别为42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶;2. 降低样品异质性,揭示潜在的关键蛋白质修饰;3. 完全、稳健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的冻干酶,用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 冻干剂以冻干粉的形式提供,装在 2000 个单位的小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助剂才能发挥作用,因此与2000单位的SialEXO冻干一起提供。浙江用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶

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