Genovis的GlycOCATCH®是一种亲和树脂，可特异性结合O-糖基化（粘蛋白型）蛋白和肽，从而实现简单的工作流程，以富集和纯化携带O-聚糖的蛋白质和肽。洗涤离心柱，并用8M尿素洗脱结合的蛋白质。对洗脱材料的分析表明，由于洗脱O-糖基化蛋白，并且树脂与非糖基化蛋白和N-糖基化蛋白的结合可以忽略不计。选择性结合 O-糖蛋白：为了测试选择性，将一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白与Genovis的GlycOCATCH 一起孵育。为了在肽水平上研究Genvois的GlycOCATCH的O-糖特异性，将O-glcyosyled肽（糖蛋白）与一系列未修饰的肽混合。Genovis测试了 SialEXO 冻干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制剂上的性能。辽宁高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶
Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖：依那西普是一种融合蛋白，由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇，使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性，制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品：（i）携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白，（ii）用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基， 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品（图1）。作为比较，SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中，以将Fc区与大多数C端糖肽分离，以促进其表征。海南高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究FucosEXO 可在 1 至 2 小时内水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 。
当在完整状态下进行分析时，EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如对应于未修饰蛋白质的单个峰所示。EPO上残留了少量用乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖，因为OmniGLYZOR对这种结构的水解效率低下。根据制造商Genvois的建议（在37°C下进行O/N孵育），两种底物蛋白也用另一种市售的去糖基化产物处理，并显示数据以供比较。另一方面，N-聚糖在内质网中翻译地连接到未折叠的蛋白质上。这导致某些 N-糖基化位点难以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折叠成其天然状态，就根本无法接近。因此，这种N-聚糖的水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。
FucosEXO中的酶在大肠杆菌中表达，带有His标签，分子量为87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然条件下水解糖蛋白上的岩藻糖，在6至8的pH值范围内显示出高活性，无需辅助因子或添加剂。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程；4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物，用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集：GlycOCATCH还可用于从复杂的样品混合物（如人血清）中选择性富集O-糖基化蛋白。简而言之，用Genovis的SialEXO处理血清并应用于GlycOCATCH树脂。洗涤树脂，用8M尿素洗脱O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化样品并使用 RP-LC-MS/MS 进行分析，并使用 Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。O-糖基化蛋白以黄色表示。因此，其水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。
GlycOCATCH设计用于特异性结合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。亲和树脂基于无活性的Genovis的OpeRATOR酶，该酶经过工程设计，可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。 结合在pH 5-8的生理缓冲液中进行。由于GlycOCATCH树脂和O-糖蛋白/肽之间的强相互作用，可以用8M尿素进行洗脱。或者，可以使用活性OpeRATOR酶进行洗脱，该酶消化O-聚糖位点的N末端结合的O-糖蛋白。在后一种情况下，肽在天然条件下回收。OpeRATOR 冻干酶包含在购买中。由于 O-糖蛋白上的旋亚氨酸化 O-聚糖与树脂结合效率更高，因此唾液酸酶混合物 SialEXO 冻干也包含在购买中。ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖结构表征。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究
OpeRATOR 来源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表达。大肠杆菌。该酶含有 His 标签，分子量为 42 kDa。辽宁高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶
Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（O-糖苷酶），可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖，用于糖分析、确认 O-糖的存在和降低样品的异质性。Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶（内切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶），可催化来自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸，因此，由唾液酸酶混合物组成的唾液酸冻干，用于去除α2-3，α2-6和α2-8连接的唾液酸，与OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下获得良好活性。辽宁高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶
Genovis的PNGase F 是一种糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物...
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