Recombinant Biotinylated Mouse IL-2 Protein

抑肽酶（Aprotinin），一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，广泛应用于生物技术领域。本研究探讨了利用大肠杆菌（E. coli）表达系统生产重组抑肽酶的方法，及其在科研和工业生产中的优势。引言抑肽酶，又称胰蛋白酶抑制剂，是一种小分子蛋白，能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶的活性。在生物制药、细胞培养和分子生物学研究中，抑肽酶的使用对于防止非特异性蛋白水解至关重要。传统的抑肽酶主要来源于动物，如牛肺，但存在外源病毒污染的风险。因此，利用大肠杆菌表达系统进行重组抑肽酶的生产，可以提供一种无动物源、高纯度、质量稳定的替代品。材料与方法基因克隆与表达载体构建：人源Ⅲ型胶原蛋白基因被克隆并构建到适合大肠杆菌表达的质粒载体中。大肠杆菌表达菌株的构建：通过转化，将构建好的质粒导入大肠杆菌宿主菌中，构建表达菌株。发酵培养：利用发酵罐进行大肠杆菌的扩大培养，以提升重组抑肽酶的产量。蛋白纯化：通过多次柱纯化获得高纯度的重组抑肽酶。在蛋白质工程领域，泛素蛋白可以作为一种标签或融合蛋白，用于提高目标蛋白的可溶性、稳定性或功能性。Recombinant Biotinylated Mouse IL-2 Protein,His-Avi Tag

RecombinantBiotinylatedHumanOX40/TNFRSF4/CD134Protein(PrimaryAmineLabeling),hFcTag性能参数分子别名（Synonyms）OX40Lreceptor;CD134;TNFRSF4;Ly-70表达区间及表达系统（Source）BiotinylatedHumanOX40/TNFRSF4/CD134Protein(PrimaryAmineLabeling)isexpressedfromHEK293withhFctagattheC-Terminus.ItcontainsLeu29-Ala216.[Accession|P43489]分子量大小（MolecularWeight）TheproteinhasapredictedMWof46.8kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto72-75kDabasedonSDS-PAGEresult.（Endotoxin）Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.纯度（Purity）>95%asdeterminedbySDS-PAGE制剂（Formulation）Suppliedas0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).储存条件Theproductshouldbestoredat-85~-65℃for1yearfromdateofreceipt.Recommendtoaliquottheproteinintosmallerquantitieswhenfirstusedandavoidrepeatedfreeze-thawcycles.Recombinant Human APLN Protein,hFc Tagα-凝血酶在肝脏中作为非活性前体-凝血酶原合成，在凝血级联反应中被启用，这种活性酶由285个氨基酸组成。

N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定义（UnitDefinition）1个酶活力单位指在10μL的反应体系中，37℃条件下1小时从10μg变性RNaseB中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。储存条件-15~-25℃保存，有效期1年。使用说明变性条件下蛋白质去糖基化1）在水中加入1μLBuffer1和目标糖蛋白（1-20μg），至终体积10μL；2）100℃温度下煮沸10min使其变性，冰上冷却，离心10秒；3）加入2μL的Buffer2、2μL的10％NP-40、6μL去离子水，总反应体积20μL；4）加入0.2~0.5μL的PNGase，轻轻混匀。在37℃孵育1-3h。非变性条件下蛋白质去糖基化1）在水中加入2μL的Buffer2和目标糖蛋白（1-20μg）至体积为20μL。2）加入0.5~1μL的PNGaseF,轻轻混匀。3）37°C孵育4-24h。注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGaseF的量和延长孵育时间。

SARS-CoV-2,whichcausestheglobalpandemiccoronavirusdisease2019(Covid-19),belongstoafamilyofvirusesknownascoronavirusesthatalsoincludeMERS‑CoVandSARS-CoV-1.Coronavirusesarecommonlycomprisedoffourstructuralproteins:Spikeprotein(S),Envelopeprotein(E),Membraneprotein(M)andNucleocapsidprotein(N).TheSARS-CoV-2Sproteinisaglycoproteinthatmediatesmembranefusionandviralentry.TheSproteinishomotrimeric,witheach~180-kDamonomerconsistingoftwosubunits,S1andS2.TheRBDofSARS-CoV-2bindsametallopeptidase,angiotensin-convertingenzyme2(ACE-2).BeforebindingtotheACE-2receptor,structuralanalysisoftheS1trimershowsthatonlyoneofthethreeRBDdomainsisinthe"up"conformation.Thisisanunstableandtransientstatethatpassesbetweentrimericsubunitsbutisneverthelessanexposedstatetobetargetedforneutralizingantibodytherapy.PolyclonalantibodiestotheRBDoftheSARS-CoV-2proteinhavebeenshowntoinhibitinteractionwiththeACE-2receptor,confirmingRBDasanattractivetargetforvaccinationsorantiviraltherapy.泛素是一种小分子蛋白，存在于真核生物中，它在细胞内起到调节蛋白质降解、信号转导、细胞周期控制。

利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato，CPI)活性多肽基因，克隆于表达载体pGEX一4T一1的多克隆位点中，得到重组质粒pGCPI，测序后将重组质粒转化到受体茵EscherichiacoliBL21中。重组茵经IPTG诱导表达，超声波破茵后，通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白，纯度大于97％。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽一S一转移酶后得到纯度大于98％的重组CPI，ELISA鉴定产物具有免疫原性，体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。研究泛素-蛋白酶体途径：重组人泛素可用于研究泛素化修饰和蛋白降解过程。Recombinant Mouse GPVI Protein,His Tag

在蛋白质表达体系中，肠激酶常用于切割融合标签，从而释放出目的蛋白，特别是在pET表达系统中。Recombinant Biotinylated Mouse IL-2 Protein,His-Avi Tag

RecombinantBiotinylatedHumanHLA-A*03:01&B2M&KRASG12V(VVGAVGVGK)MonomerProtein,His-AviTag性能参数分子别名（Synonyms）MHC;KRAS;K-Ras2;KRAS2;C-K-RAS;CFC2;K-RAS2A;K-RAS2B;K-RAS4A;K-RAS4B;KRAS1;KRAS2;NS;NS3;RASK2;GTPaseKras;KI-RAS;RALD表达区间及表达系统（Source）BiotinylatedHumanHLA-A*03:01&B2M&KRASG12V(VVGAVGVGK)MonomerProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-TerminusItcontainsGly25-Thr305(HLA-A*03:01),Ile21-Met119(B2M)andVVGAVGVGKpeptide.[Accession|NP_002107.3(HLA-A*03:01)&P61769(B2M)&VVGAVGVGK]分子量大小（MolecularWeight）TheproteinhasapredictedMWof50.09kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto51-60kDabasedonSDS-PAGEresult.（Endotoxin）Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.纯度（Purity）>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制剂（Formulation）Suppliedas0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Recombinant Biotinylated Mouse IL-2 Protein,His-Avi Tag