厦门广州鼠尾胶原

简介：鼠尾I型胶原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在无菌下制备，纯度达到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于细胞培养皿的包被，特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养；也可用于制备三维胶原凝胶，使细胞在模拟的三维环境中生长。质量标准：1、SDS-PAGE分析纯度大于95%。2、无菌检验结果为阴性。3、本品2μg/cm2包被细胞培养皿后培养PC-12细胞，贴壁及生长正常。4、本品浓度1mg/mL，pH7.0时形成具有一定强度的三维胶原凝胶，NIH-3T3细胞在三维凝胶内生长正常、PC-12细胞在三维凝胶表面生长正常。将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。厦门广州鼠尾胶原

鼠尾胶原包被培养板：胎干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,进而形成血管,因而成为血管组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:探讨建立定向诱导人胚胎干细胞向血管内皮细胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养人胚胎干细胞H1,将H1细胞团块转移到鼠尾胶原包被的培养板,贴壁24-48h后,培养基换为含不同辅助因子和内皮细胞生长添加剂的EGM-2内皮细胞培养基。结果与结论:①在EGM-2内皮细胞培养基诱导下,细胞逐步表达内皮细胞特异性标记基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化细胞表达内皮细胞特异性标记VE-cadherin、CD31。③分化细胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。说明将人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上,通过EGM-2内皮培养体系诱导,可直接分化为功能性血管内皮细胞。为研究胞外基质对诱导胚胎干细胞血管内皮细胞分化的作用以及相关信号分子机制打下了基础。唐山正规鼠尾胶原服务电话建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。

提取鼠尾腱胶原工艺的优化：单因素分析,胶原提取率在一定参数范围内随浸提时间、乙酸浓度及料液比的增加而增加。正交试验,鼠尾腱胶原提取的较佳工艺参数为浸提时间72h、乙酸浓度0.5mol·L-1、料液比为1∶40。SDS-PAGE电泳显示,样品为Ⅰ型胶原,单宁酸沉淀实验显示胶原降解程度低,傅里叶红外光谱显示胶原结构完整。样品氨基酸含量测定符合胶原蛋白的成分特征。中性胶原溶液在37℃时能够形成固态胶原凝胶,胶原凝胶经过碳化二亚胺(EDC)交联后,扫描电镜下显示内部相互连接,构成孔径适中的蜂窝状多孔结构。结论:成功建立并优化鼠尾腱胶原蛋白的提取工艺,得出浸提时间、乙酸浓度及料液比等因素的较佳工艺参数,有效提高了鼠尾腱胶原的提取效率。

鼠尾Ⅰ型胶原：选择适当的骨修复材料是治好骨缺损的中心环节。目前，临床上常用的有人工骨移植、自体骨移植和同种异体骨移植。其中，人工骨材料多为磷酸三钙、半水硫酸钙等含有钙和磷的无机矿物材料[1-2]，由于不含自体骨组织中的有机大分子Ⅰ型胶原蛋白，其临床疗效远远低于自体骨组织。但是，自体骨移植和同种异体骨移植均来源于人类自身骨组织，数量有限，难以满足临床需要。因此，研发与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料，成为全世界骨组织工程学者孜孜以求的目标。由于天然骨组织是Ⅰ型胶原蛋白和羟基磷灰石钙生物矿化的产物，在分子结构上，羟基磷灰石钙晶体是以Ⅰ型胶原纤维为模板，呈片状镶嵌在胶原纤维分子间隙，沿着胶原纤维的长轴纵向矿化生长。本研究仿生天然骨组织的分子结构，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型胶原蛋白，重构形成Ⅰ型胶原纤维，然后将Ⅰ型胶原纤维放置在矿化液中模拟人体内骨生物矿化，通过透射电子显微镜(TEM)和电子衍射观察羟基磷灰石钙晶体在胶原纤维内部的骨生物矿化。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。本品可用于细胞培养皿的包被，特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养。

鼠尾胶原：鼠尾胶原是一种天然培养基和一种天然的黏附剂。实验设备及材料：大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。 实验内容：1、制备鼠尾胶原（两个同学一组操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。制备鼠尾胶原：1、取大鼠尾巴洗净，75%酒精浸泡5分钟；2、手持尾巴，用止血钳夹住鼠尾的，折断尾骨后拉出尾腱；3、将尾腱剪断置于平皿中，生理盐水浸泡；4、重复步骤2、3，直至尾腱量够用；5、吸去生理盐水，将尾腱称重（0.5-1克）；6、将尾腱置于平皿内剪碎，转移至三角烧瓶中；7、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液；8、摇晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期；9、离心，4000转/分，10-15分钟；10、吸取上清，分装成小瓶，4℃保存。当我们需要在培养瓶或培养皿内放置小玻片，制备细胞爬片时，可在瓶底涂一层胶原。厦门广州鼠尾胶原

不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出。厦门广州鼠尾胶原

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用：原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2诱导。24 h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。厦门广州鼠尾胶原