石家庄鼠尾胶原厂家

鼠尾胶原简介：鼠尾I型胶原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在无菌下制备，纯度达到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于细胞培养皿的包被，特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养；也可用于制备三维胶原凝胶，使细胞在模拟的三维环境中生长。质量标准：1、SDS-PAGE分析纯度大于95%。2、无菌检验结果为阴性。3、本品2μg/cm2包被细胞培养皿后培养PC-12细胞，贴壁及生长正常。4、本品浓度1mg/mL，pH7.0时形成具有一定强度的三维胶原凝胶，NIH-3T3细胞在三维凝胶内生长正常、PC-12细胞在三维凝胶表面生长正常。探讨应用鼠尾胶原在豚鼠前庭毛细胞膜片钳实验中的促进毛细胞贴壁效果。石家庄鼠尾胶原厂家

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：三维胶原的制备 鼠尾胶原蛋白 型在浓度1mg/ml 以上， pH 左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度 1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中，在成胶过程中需要加入 0.06体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。 需要的溶液 （均需要无菌、 预冷） 10mg/L 酚红用于pH 指示） 0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一 般不用)，双蒸水 200ul鼠尾胶原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到胶原溶液中， 会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的 胶原凝结） 立即混匀。再加入 100ul 10PBS 10培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后 pH 左右，如果PBS 或培养液中没有加 酚红，初次使用时需要用 pH 试纸测试)。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。厦门正规鼠尾胶原服务电话制备鼠尾胶原：将尾腱剪断置于平皿中，生理盐水浸泡。

鼠尾胶原备用胶凝程序：1）在冰上放置以下物品：胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1M NaOH。2）确定胶原蛋白I待使用溶液所需的较终浓度的体积。3）在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。4）在无菌条件下执行以下步骤。4.1加入10×PBS（终体积/10）mL4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积（不要添加到管中直到步骤4.6为止）终体积x终胶原蛋白I浓度（mg/mL）。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的胶原体积×0.023）mL的无菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水：添加蒸馏水体积=V（终）—V（胶原蛋白）—V(10× PBS）—V（1M NaOH）4.5混合管中的物质并放入冰中。4.6加入胶原蛋白I并计算体积，混匀，冰上备用。5）胶原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小时。6）使用时，无菌条件下将溶液加入到细胞培养装置中37°C凝胶30min。

鼠尾胶原醋酸溶解：1．将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3．稀释一定数量的胶原溶液。4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。制备鼠尾胶原：离心，4000转/分，10-15分钟。

一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将无组织纤维、脂肪和多糖残留的鼠尾腱，真空冷冻干燥备用；(2)冻干鼠尾腱经低温冻干粉碎至200?400目； (3)在冰水浴中将粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶胀，鼠尾腱与醋酸的固液比为I克:10mL?I克:120mL，期间不断搅拌，防止冻结成块，得到胶原溶胀液； (4)称取胃蛋白酶加入到胶原溶胀液中，鼠尾腱与蛋白酶质量比为50: I?100: 1，在4°C，48?74小时酶解，期间间歇性搅拌； (5)将黏稠的胶体溶液进行高速冷冻离心处理，收集上清液；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液缓慢加入上清液中，不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出，4°C沉淀10小时，去除上清液，絮状溶液高速冷冻离心处理，收集沉淀。免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。贵阳鼠尾胶原报价

自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性。石家庄鼠尾胶原厂家

胶原蛋白的提取方法：1.碱法提取：碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。如Holzer等[5]采用1 %～1.5 %石灰水浸泡的方法提取胶原蛋白。由于它容易造成肽键水解，因此得到的水解产物分子量比较低。所以，若想保留胶原的三股螺旋结构，此法不可取。2.盐法提取：盐法提取胶原蛋白所用的中性盐有盐酸-三羟甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化钠、柠檬酸盐等。在中性条件下，当盐的浓度达到一定量时，胶原溶解。并且可采用不同浓度的氯化钠对提取的胶原蛋白进行盐析处理，可以沉淀出不同类型的胶原蛋白。石家庄鼠尾胶原厂家