在保存抗体时请注意以下几点: 为保持比较大反应性,应按照厂家说明书保存试剂(如,当指定保存温度为2-8℃时,应避免将抗体置于室温下)。保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中,远离组织固定剂和交联试剂。除非加入稳定蛋白,如BSA(1% w/v),否则抗体不得 在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。保存时遇到的主要问题是细菌或***污染。 如果抗体保存在2-8℃超过2-3天,建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂,如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。上海买Sigma抗体哪家靠谱?浦东新区CST抗体抗体代理商
抗体和流式细胞术 虽然细脆群可以采用光散射性质进行大致鉴定,但细胞亚群的更准确鉴别需要有细胞亚型特异性表面或胞内分子结合探针。例如,外周血样品中的所有淋巴细胞可能具有相同的尺寸和胞内复杂性。可将细胞表面受体(例如CD4、CD8和CD19)特异性荧光结合抗体应用于细胞悬浮液,以鉴别辅助T细胞、细胞毒性T细胞以及B细胞。**基本的单激光流式细胞分析仪也配备了足够的过滤器,以便可以同时检测四个荧光基团;目前,在单验一项实验中,可以区分多达18个波长的荧光。获取来自于这些复杂荧光基团的信号需要有多个激光器、适当的过滤器和抗体上标记荧光的选择,因为物种间交叉反应性和二抗与非特异性靶标的结合,容易干扰数据结果。闵行区WB抗体抗体哪家好益启生物提供专业的多种正规科研抗体。
关于抗体质量 抗体的质量决定了整个免疫检测的成败, 是在选择抗体时优先的考虑因素。 通常认为,特异性决定抗体功能,所以抗体必须拥有高质量,尤其是商业化的抗体。然而出人意料的是,通常情况并非如此。尽管理论上确实可以模拟和预测抗体结合的特异性,但是数十年的使用经验证明,一些因素如免疫原的抗原性和***性、抗体浓度、缓冲液、免疫作用和样品制备等因素都会对交叉反应和非特异性结合起到***的促进作用。 自70年代以来,当研究人员开始将抗体用作蛋白探针时,抗体性能不一致的问题一直困扰着他们。
无信号 在检测之前,转印膜在贮藏过程中发 生蛋白降解 二抗选择错误 曝光时间太短 抗原上样量不足 抗原可能被破坏 检测系统 一抗的亲和力较低 化学发光底物已丧失活性。 已从膜上剥离抗体并再次杂交。 处理方法 使用新转的膜进行实验。 检查是否使用适当的二抗。 增加曝光时间。 在凝胶上载入更多的抗原,或在载入之前使用超滤管浓缩样品, 或使用免疫沉淀,以增加凝胶中的目标蛋白量。 检查确保电泳处理未破坏抗原性。 增加(和优化)一抗的浓度和培养时间、温度。Calbiochem抗体哪家靠谱?
如果目标蛋白的种属不包括在已检测的种属中,您可以通过蛋白数据库快速检查特异性蛋白序列。 抗体种属来源 一抗的种属来源在选择二抗时有很大的作用。二抗应尽量与您的样本物种相隔较远。 在说明书或供应商网站上查询已验证的数据: 1、查看说明书或供应商网站上的验证数据并检查数据质量,及验证实验方法。 2、查看检测的样本为何种类型(细胞裂解液、组织匀浆=等)。 3、只使用纯化重组蛋白得到的结果可能无法作为细胞或组织样本的比较好参考!上海H3抗体哪家靠谱?上海WB抗体抗体参数
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不均匀样品,如混浊液、样品中有颗粒节 样品和标准品混匀不亮分移液器加样不准 移液器在样品和/或标准品使用时存在题留 在解育过程中试剂混合不充分洗涤不充分 液体蒸发 稀释倍数的计算不正确修改实验程序样品处理不正确 处理办法: 确保只使用特定批次的试剂进行实验。 检查所用的实验稀释度(按国说明书推荐的稀释度进行实验)检查横孔板分光光度i计中的渡长。 检查在产品说明书中该批次的阐育时间。(酶底物的解育时间用于20-28℃范围内)浦东新区CST抗体抗体代理商