对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析
法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编
号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。
Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤
样本制备
凝胶电泳
转膜
封闭非特异性结合
加入抗体
检测
Western Blot 实验流程图
Troubleshooting
问题 可能的原因 处理方法
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比较好将其保存于+4℃。抗体上的荧光素较易感光淬灭。因此，荧光结合抗体应在
深色瓶中避光保存。长期保存时，某些抗体溶液可能产生不溶的成分。沉淀物可通过10000 g快速离心去除。
抗体的应用与优化
在19世纪末期，人们认识到了特异性抗体-抗原相互作用的价值，进而多种免疫技术问世，其中大多数目前仍在应用。从分析血液成分的沉淀素试验，到高度特异性的染色质免疫沉淀技术，再到使用自动化成像流式细胞仪上进行的免疫染色实验，以抗体为基础的工具在生物学和生物医学研究中一直起着重要的作用。 金山区标签抗体抗体联系方式上海益启生物抗体订购方便。
无信号 在检测之前，转印膜在贮藏过程中发
生蛋白降解
二抗选择错误
曝光时间太短
抗原上样量不足
抗原可能被破坏
检测系统
一抗的亲和力较低
化学发光底物已丧失活性。
已从膜上剥离抗体并再次杂交。
处理方法 使用新转的膜进行实验。
检查是否使用适当的二抗。
增加曝光时间。
在凝胶上载入更多的抗原，或在载入之前使用超滤管浓缩样品，
或使用免疫沉淀，以增加凝胶中的目标蛋白量。
检查确保电泳处理未破坏抗原性。
增加（和优化）一抗的浓度和培养时间、温度。
在解育过程中，检查密封盖与平板的接触情况。确保样品所用的稀释倍数在数据计算范围内。认真遵守产品说明书中的指示（第育时间、稀释等）。
确保样品根据建议的样品操作抽提、配制和贮藏（聚丙烯试管，澄清样品的贮戴温度为-20℃）。
多因子免疫检测法(Multiplex)
多因子检测是在一次分析中分析多个靶标蛋白的方法。它是生物标记物筛选和蛋白分析的创新技术，它使研究人员能够同时考察多重细胞间或细胞内的总蛋白或磷酸化蛋白，这些蛋白涉及细胞、组织或有机体的功能。 Sigma抗体的报价具体是多少呢?
用途极为***的液相悬浮芯片法，是基于Luminex公司开发的xMAP®技术。
多因子检测技术是三种**技术的结合：xMAP®微球、
Luminex液相悬浮芯片仪和分析软件。
Luminex xMAP*微珠免疫检测法的原理微球用不同浓度的红色和红外两种受光染料染色，可产生100种不同的颇色。因此，在一次分析中，每个微球具有一个基于染料浓度的光谱地址"，可在Luminex液相悬浮芯片*中读取和鉴别。这些微球用搓获抗体覆盖，以便特异性结合样品中的靶标分析物"。加入报告荧光标记的检测抗体，以完或夹心ELISA，获得读数。 MYC抗体哪家正规可靠？浦东新区Sigma抗体抗体联系电话
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信号弱
信号高
本底较高
准确度较低（一偶然误差）
计算的教据过高或过任《一系统误差，数据与"标准数据"的偏差）
可能的原因： 实验试剂使用错误实验试剂损坏
所用实验试剂稀释度错误仪器的过滤器选择错误（波长）前育时间过短，温度过低
试剂温度不正确
在较高浓度时，叠氮化钠、燕基乙身或DTT可能干扰过氧化物恃活性。所用实验试剂稀释度错误醇育时间过长，温度过高
洗洛不足洗得污染
试剂或小瓶/试管受到以前实验的污染
所用实验试剂（抗体和等结合物）稀释度错误 奉贤区抗体
