原代细胞的培养与建系 细胞的来源多样,培养方法也各不相同,凡是来源于胚胎、组织部位及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原 代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至 10~20 代以 上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化,经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群,称之为细胞 株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些基本技术是从事细胞培养工作的基础,只有熟悉和掌握了基本技术,才可能更 快捷地学习和掌握其他方法,本章重点叙述常用的基本技术。 靠前节 原代细胞的取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件,是进行细胞培养的靠前步,若取材不当,将会直接影响细胞的体外培养。较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质。苏州正规原代细胞分离试剂盒服务电话

原代细胞与细胞系该如何选:原代细胞生长缓慢,一般认为,原代细胞培养的第1代和传代到第10代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40-50代,这种传代细胞叫做细胞株。当细胞传至50代以后又会出现“危机”,这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有变的特点,从而可能无限制地传代下去,这种传代细胞称为细胞系。厦门正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。

关于细胞株和细胞系以及原代细胞的区别:1、获取方法不同,原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞;细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物;细胞系是原代细胞培养物经开始传代成功后所繁殖的细胞群体。2、原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40--50代,这种传代细胞叫做细胞株;细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出现“危机”,不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变,并且带有变的特点,有可能在培养条件下无限制地传代下去,这种传代细胞称为细胞系。
原代细胞的获取:1.培养时间无论是酶消化法还是组织块法,取样后培养时间较少需要一周以上的时间,期间可换液或者传代。2.换液时间无论酶消化法还是组织块法,在培养期间需要随时关注细胞的生长状况,需观察其是否贴壁,是否污染,组织块法要观察是否有细胞迁移出来。正常情况下48~72h可换液一次。3.细胞状态判断正常贴壁细胞在培养几天后,会逐渐贴满整个瓶底或者皿底,有的呈纤维状,有的呈多边形。下图均为比较健康的原代细胞图(左:小鼠成纤维细胞;右:鸡胚成纤维细胞;下:人成纤维细胞)。给悬浮培养的细胞换液时要注意不要吸出细胞。

选择原代细胞的原因:长期以来,科学家多依赖永生化的细胞系来进行各种研究,但在过去十年,随着细胞生物学的发展,细胞培养领域发生了巨大变化,新型的技术和培养试剂让使用原代细胞作为研究对象成为可能。相比于细胞系,原代细胞更多保留了体内原始组织的生物学特征,如生长和衰老,因此通过原代细胞可建立更好的细胞疾病模型。原代细胞(Primary cells)是指来源组织,经过特定分离方法制备而成的初始细胞。 原代细胞离体时间短且不经过永生化过程,其生物学特性未发生很大变化,仍保持原有的遗传特征,可更好地反映细胞在体内的生长状态,从而获得与体内生理功能更接近的数据,很适合用于药物测试、细胞分化和转化等实验研究。也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入**生存环境的变化过程。广州原代细胞分离试剂盒
原代细胞不仅普遍应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究。苏州正规原代细胞分离试剂盒服务电话
原代细胞培养注意事项:1.收到细胞时,要镜下观察是否有污染情况;收到细胞的前几天,要做好各种倍数的镜下拍照记录,以防细胞出现问题后,可以跟公司很好地沟通。2.收到细胞后,不要马上处理。应置于培养箱中静置4h以上再操作。如果不着急,可静置过夜。3.细胞的靠前次传代,一定要密度高一些传代,原代细胞传代密度低,很难长起来。建议1:2-1:3传代。4.原代细胞传代时(内皮细胞,贴壁为例),0.25%+0.53nM的胰酶消化,1ml消化液37度培养箱内消化30sec,再加入5ml培养基(正常消化贴壁细胞,我们使用胰酶和培养基的量是1:1,但是原代细胞必须用大量培养基中和胰酶)。5.原代细胞不建议冻存,因为冻存很容易复活不成功。如果要冻存的话,建议在P2或P3代冻存,冻存液中的血清越多越好,建议比例9(血清):1(DMSO)。6.原代细胞复苏时,置于37-38度水浴融化细胞,并加入10ml培养液(正常贴壁细胞复苏时,也可以使用这种比例,复苏成活率会较大提高),离心重悬铺板。苏州正规原代细胞分离试剂盒服务电话
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原代细胞标准化培养:由于每种原代细胞培养的条件迥异,而且每个实验室都摸索出自己的培养条件,而对于一个特定的组织块,所用培养条件不一样,得出的所需细胞族群就不一样,因为每种组织块都含有不同种类的细胞群,而每一种细胞群在所选定的培养条件下(比如所选蛋白分解酶的种类和条件,细胞因子的种类,基础培养基的种类或者是培养时间长短)都会得出不同的结果。由于各实验室采取不同的培养条件,即使是同一块心组织就有可能造成A实验室获得30%的心肌细胞,70%其他种类细胞,而B实验室却能获得70%所需心肌细胞,30%为成纤维、脂肪等种类。这样的话,即使是做同一项目的实验,就有可能得出相反的科学结论。给培养液中加入低浓度...