根据gm20541的cdna序列设计引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3；(g)以提取的cdna为模板，进行rt-pcr。扩增后进行电泳。结果见图4中b，可以看出，通过rt-pcr方法检测gm20541在gm20541基因敲除纯合子小鼠的视网膜中表达量降低。图4的b中ctrl是指野生型对照，sixko是指gm20541基因敲除纯合子小鼠；gm20541rnalevel是指rna表达水平相对变化，以野生型表达水平为1。实施例3对4月龄的gm20541基因敲除纯合子小鼠进行erg视力检测：1暗适应动物应整夜暗适应，环境应做到没有光线；2次日麻醉：称重，腹腔内注射；宜深度麻醉；3动物固定及散瞳：麻醉完成后，在暗红光照明下将小鼠用胶带固定在动物试验平台的前方：需保证小鼠正"趴"，即相对于闪光刺激器的刺激口，双眼高度一致，充分暴露，滴加散瞳剂。4电极安装：将视网膜电图仪(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)预热后，在耳夹电极涂上导电膏，夹尾巴，插入放大器“地”接口；双头的针电极插入后颈皮(大约在两耳中间)，同时接两个通道的“负”接口；金环电极夹在动物实验平台的电极支架上，仔细调整其角度。由于大鼠面神经与人类相似,易于暴露.因此通过大鼠面神经损伤致瘫的模型制作方法为研究者提供更多的思路。上海高脂高糖动物模型实验室
所用仪器为bio-rad的化学发光凝胶成像系统。结果见图1中c和d，可以看出，通过免疫印迹(westernblot)的方法证明了gm20541蛋白在小鼠脑、肝脏、视网膜、心脏、肾脏以及脾中均有表达。实施例2本实施例以小鼠为目标动物，对本发明提供的视网膜色素变性疾病模型的构建方法进行说明，gm20541基因敲除的路线如图2所示，具体操作如下：基因敲除小鼠获取步骤：1将与小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有报告基因gfp的表达框、有neo抗性基因的表达框、两端有同向排列loxp位点的第3外显子和3’端臂克隆到bac载体(图2)以用于替换欲敲除的gm20541基因第3个外显子；2利用dna同源重组技术将gm20541基因中的第3个外显子替换，得到gm20541基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞；3利用步骤2得到的胚胎干细胞制备得到含gm20541基因敲除细胞的嵌合体小鼠(图2)；4将步骤3得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选出gm20541基因敲除的杂合子小鼠(图2)。鉴定：实施例2中长距离pcr鉴定阳性子一代鼠的实验结果，扩增5’端长臂使用引物对gm5’lrf和sa3’r，扩增产物为。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。结果见图3中a。宁夏动物模型技术采用复合改良法造模,是目前 IgA 肾病中较为可靠、稳定、成功率高,且病理、临床指标近人类 IgA 肾病的动物模型。
17-高原湿度环境模拟装置，18-动物行为学远程观察单元，19-功能控制面板。具体实施方式为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型，即所描述的实施例是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本实用新型实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本实用新型的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本实用新型的范围，而是表示本实用新型的选定实施例。基于本实用新型的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。需要说明的是，术语“”和“第二”等之类的关系术语用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素。
e：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图b波统计；scotopicamplitude：暗光测定峰值；flashintensity：闪光强度；a-wave：a波；b-wave：b波。图6：光适应视网膜电图(erg)检测结果；图中：a-b：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图轨迹图；c：20cd·s/m2光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应闪烁(flicker)视网膜电图轨迹图；d：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图a波统计；e：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图b波统计；f：20cd·s/m2光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应闪烁(flicker)视网膜电图统计。sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠；ctr是指野生型；het是指杂合子。图7：视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠视网膜切片免疫组化染色结果；小鼠年龄：4个月；os：outer-segment(外节)；is：inner-segment(内节)；onl：outernuclearlayer(外核层)；inl：innernuclearlayer(内核层)；图中：a：视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠视网膜石蜡切片的h&e染色结果，外核层及内核层均变薄；b：对不同部位的gm20541敲除鼠视网膜外核层厚度统计。图8：视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠ihc染色结果。避免了在人身上进行实验所带来的风险。
饲养仓左右箱体上分别设置有小物件传递窗和大物件传递窗，所述代谢笼还包括设置在代谢笼上的投料斗、饮水瓶和设置在代谢笼下方的聚粪斗、尿液排出口、粪便排出口。进一步地，所述无极调控微负压装置包括进风系统、排风系统和霍尼威尔或西门子调控模块，所述进风系统设置在功能设备集成底座内，所述排风系统设置在饲养仓顶部。进一步地，所述高原低氧环境模拟装置包括惰性气源，所述惰性气源与进风系统连接，所述惰性气源与进风系统之间设置有比例式气阀，还包括设置在饲养仓内的嵌入式氧测定仪。进一步地，所述高原光照环境模拟装置包括可见暖光系统和照明亮度无极控制系统，所述可见暖光系统设置饲养仓顶部。进一步地，所述高原温度环境模拟装置包括降温系统、升温系统、温控系统和温度采集显示系统。进一步地，所述高原湿度环境模拟装置包括加湿系统、除湿系统、湿度控制系统和湿度采集显示系统。进一步地，所述动物行为学远程观察单元包括coms高清图像采集系统、数字视频传输系统、频硬件解压卡、视频显示系统。综上所述，由于采用了上述技术方案，本实用新型的有益效果是：1、本实用新型非全自动控制系统，需要人为观察并手动调节隔离器内部环境。SD大鼠脑缺血模型建立。上海乳鼠动物模型
上面是我们已构建成功的动物模型，我们还可以根据客户实验方案构建其它模型，具体要求请咨询。上海高脂高糖动物模型实验室
40mmnaoh，)，并在金属浴100℃加热1h；(3)取出离心管，冷却至室温后，加入100μl的中和液(40mmtris-hcl，)，10000g离心2min后，取上清用于小鼠基因型鉴定。(3)pcr扩增：按照如系配置pcr反应体系2×taqmix：10μl尾巴组织裂解液：2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward)：1μl(浓度：10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse)：1μl(浓度：10mm)ddh2o：6μl。引物序列如下：gm20541-loxp-forward序列：5’-attccccttcaagatagctac-3’；gm20541-loxp-reverse序列：5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’；six3-cre-forward序列：5’-gccgccgggatcactctcg-3’；six3-cre-reverse序列：5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。扩增程序：pcr反应体系配制完后，在pcr仪上于95℃预加热5分钟使模板dna充分变性，然后进入扩增循环。在每一个循环中，先于95℃保持30秒钟使模板变性，然后将温度降到复性温度58℃，保持30秒，使引物与模板充分退火；在72℃保持30秒，使引物在模板上延伸，合成dna，完成一个循环。重复这样的循环25次，使扩增的dn段大量累积。，在72℃保持5分钟，使产物延伸完整，4℃保存。(4)凝胶电泳称取1g琼脂糖放于100mltaebuffer中。上海高脂高糖动物模型实验室
