超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。超滤浓缩管的优势您了解多少呢?黄浦区浓缩管联系人
Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南 亲和纯化 用于纯化GST•Tag,His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5 mL裂解液操作 6次低速离心,总耗时~100分钟(含65分钟孵育时间) 1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5 mL漂洗缓冲液。 1,000×g离心1 min。 2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h,其间可温和搅动促进结合。 3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。 4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1 min。 外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理 已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。 超滤方法纯化具体操作步骤举例 Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]黄浦区浓缩管联系人超滤浓缩管的优点有很多。
膜的吸附损失 对于浓度很低及珍贵的样品,除了考虑截留效率和操作方便外,额外 要关注的是采用的超滤膜及设备对目标蛋白的潜在非特异性吸附损 失。不同膜材质对生物分子吸附程度不同,默克密理博的 Ultracel® 再 生纤维素膜在各类膜中对生物分子吸附**小,是 Amicon® Ultra 超滤管 等超滤产品成为优先的**技术关键之一。滤膜和装置表面对溶质的 吸附对样品收率会产生直接影响,所以如果希望尽可能提高得率,就 应该考虑采用较小的设备和膜面积。小量的、较为稀释的样品应该选 用膜面积小的装置,同时保证一定的流速。默克密理博设计了一系列 离心式或搅拌式装置,配合不同的膜面积、不同的截留分子量的切向 流系统,支持您获得理想的处理效果。
虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以比较大化样品的回收,同时节省过滤时间。截留微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据NMWL分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL的超滤膜应该截留至少90%以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时 膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小 会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截 留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以比较大化样品的回收,同时节省过滤时间。益启生物公司作为上海一家专业从事超滤浓缩管代理销售。
样品的澄清、过滤和除菌 Ultrafree®-MC和Ultrafree®-CL微滤管 Ultrafree®-MC(0.5mL)和Ultrafree®-CL(2mL)是一次性使用的微滤离心管,可以用于各种水性样品和在某些溶剂中的样品除颗粒物、除沉淀的处理。提供两种体积及多种膜孔径以及已经经过无菌处理的产品供选择。Ultrafree®微滤离心管操作简便、样品回收率高且重复性很好,是蛋白和核酸样品处理的理想选择。 特点与优点 有0.1-5.0μm五种膜孔径供选择 采用高回收率的亲水Durapore® (PVDF)膜和亲水PTFE膜 提供无菌包装和非无菌包装形式产品 过滤速度快,数据稳定、重现性好 上样体积为0.5mL (MC)或2mL (CL) 配合1.5mL离心管固定转子(MC)或15mL离心管转子使用 顶盖颜色标识易于区分膜孔径。益启生物公司主要超滤浓缩管代理销售。上海默克15ml超滤浓缩管订购
益启生物公司的超滤浓缩管系列有很多。黄浦区浓缩管联系人
***的化学兼容性 •膜与管壁采用特别的热封工艺,避免使用胶水 带来的化学溶出对样品的污染 •Ultracel® 超滤膜和聚丙烯管材性能稳定,化学 兼容性好 •pH3-10 适用 特别推荐应用(提供实验报告作为参考) Amicon® Ultra 离心超滤管: • 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换 • 尿液中蛋白质的浓缩 • 游离标记物的去除 • 抗体的快速浓缩 • 血清多肽生物标志物的纯化 • 双向电泳蛋白样品制备 • 样品去垢剂的去除 操作更安心 •设计精巧、紧凑,一体化结构确保不会发生渗漏,即 使是极为珍贵的样品也能非常放心地操作 •性能稳定,数据平行性、重现性好,适合精细操作和 高通量操作黄浦区浓缩管联系人