所用仪器为bio-rad的化学发光凝胶成像系统。结果见图1中c和d,可以看出,通过免疫印迹(westernblot)的方法证明了gm20541蛋白在小鼠脑、肝脏、视网膜、心脏、肾脏以及脾中均有表达。实施例2本实施例以小鼠为目标动物,对本发明提供的视网膜色素变性疾病模型的构建方法进行说明,gm20541基因敲除的路线如图2所示,具体操作如下:基因敲除小鼠获取步骤:1将与小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有报告基因gfp的表达框、有neo抗性基因的表达框、两端有同向排列loxp位点的第3外显子和3’端臂克隆到bac载体(图2)以用于替换欲敲除的gm20541基因第3个外显子;2利用dna同源重组技术将gm20541基因中的第3个外显子替换,得到gm20541基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞;3利用步骤2得到的胚胎干细胞制备得到含gm20541基因敲除细胞的嵌合体小鼠(图2);4将步骤3得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育,在后代中筛选出gm20541基因敲除的杂合子小鼠(图2)。鉴定:实施例2中长距离pcr鉴定阳性子一代鼠的实验结果,扩增5’端长臂使用引物对gm5’lrf和sa3’r,扩增产物为。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’;sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。结果见图3中a。由于卵巢早衰的病因多种多样,如自身免疫功能异常、遗传因素、代谢因素、化疗、放疗及等。江苏实验动物模型服务

brain:脑组织;liver:肝脏;retina:视网膜,intestine:肠;muscle:肌肉;heart:心脏;kidney:肾脏;spleen:脾;b:图1中a的统计结果;c:westernblot检测gm20541蛋白在不同组织的表达;d:图1中c的统计结果。图2:gm20541基因敲除小鼠的构建路线;图中sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠;ctr是指野生型;het是指杂合子。图3:中长距离pcr鉴定子一代鼠的结果;图中:a:扩增5’端长臂使用引物对gm5’lrf和sa3’r,扩增产物为;其中a2,3,6,9,10,b1为阳性;b:扩增3’端长臂使用引物对neof和gm3’lrr,扩增产物为。其中:a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g为阳性杂合子,+/+为野生型对照。图4:gm20541基因敲除小鼠的鉴定;a:gm20541基因敲除小鼠的基因型鉴定结果;b:实时定量pcr实验分析gm20541敲除小鼠视网膜中基因敲除效率,证明gm20541在敲除小鼠视网膜中不再表达;sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠;ctr是指野生型;het是指杂合子。图5:暗适应视网膜电图(electroretinogram,erg)检测结果;图中:a-c:不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图轨迹图;d:不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图a波统计。江苏动物模型构建特发性肺纤维化(IPF)小鼠模型建立。

轻微的接触角膜的中心顶端。一通道正极接右眼,二通道正极接左眼。通过针管对双眼滴生理盐水,改善金环电极及角膜的接触效果。保证两个金环电极以相同的角度、方式接触两眼角膜中心正端的相同位置。5记录示波信号确认无误后,关闭暗红光。可以先尝试记录一下暗适应光强为·s/m2的erg检测,确认一下信号的质量:如果双眼的振幅出现了与预期不同的较大差异,建议再次检查金环电极的安装位置。然后依次记录暗适应光强为·s/m2的信号。需要注意的是,完成暗适应·s/m2光强检测后,系统将自动打开背景光。同样的,需要打开定时器,光适应10-15分钟,再记录。6经过光适应后,依次记录光适应·s/m2以及·s/m2光强下波形,记录·s/m2光强下闪烁视网膜诱发电位。结果发现在4个月时,与ctrl(对照)小鼠比较,cko(gm20541基因敲除纯合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗适应和光适应条件下均明显降低,表明gm20541敲除后导致视力受损(见图5和图6)。实施例4视网膜石蜡切片h&e染色:对4月龄小鼠的视网膜进行石蜡切片、苏木精-伊红染色法(h&e染色方法)染色,具体操作如下:1)快速取小鼠眼球组织,并置于固定液中固定24h;2)石蜡包埋,切片,厚度为4μm;3)切片常规用二甲苯脱蜡。
然后5%的nds。含有%triton)封闭通透2h,孵育一抗,4℃过夜。第二天,pbs清洗三次后,孵育相应的荧光二抗,然后再用pbs清洗三次,封片,观察。结果见图8,在小鼠4月龄时,通过视网膜冰冻组织切片染色外节抗体rhodopsin以及内节抗体nak-atpase后发现,相较于野生型小鼠,gm20541基因敲除纯合子小鼠(图中sixko)视网膜外节明显缩短,表现出了明显退化表征。综上,可以看出,本发明实施例以小鼠为例,通过cre-loxp基因敲除技术,在小鼠视网膜前体细胞中特异性敲除gm20541基因,小鼠表现出了视力受损,视细胞外节变短退化以及视细胞丢失等视网膜色素变性疾病典型表征。由此充分说明,在视网膜前体细胞敲除gm20541基因,可以使目标动物表现出视网膜色素变性疾病。视网膜前体细胞敲除gm20541基因的动物,可以作为视网膜色素变性疾病模型。该疾病模型可以用于视网膜色素变性疾病研究等领域中,为该疾病的研究例如发病过程、机制以及相关药物的筛选提供一种新的模型。虽然本发明实施例展示了在小鼠的视网膜前体细胞敲除gm20541基因后的表型,但本领域技术人员容易理解到,小鼠作为哺乳动物的代表性动物,在其他的哺乳类动物中敲除gm20541基因或其同源基因也应当具有相似的表型。通过阿霉素(Adriamycin,ADR)腹腔注射给药(Adriamycin,ADR)试图造成小鼠心衰。

曾为国内、外医药企业做过多个药物的临床前药理研究,研发产品已成功上市。在中国工作期间参加完成10项课题,在美国参与完成了NIH(NationalInstitutesofHealth)及AHA(AmericanHeartAssociation)的多个基金项目。发表学术论文60余篇,曾获得省部级一、二等科技奖7项。在学术期刊如Nature,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,JournalofClinicalInvestigation,Circulation,CirculationResearch,Cell,NatureCommunications,NatureMetabolism,ScienceTranslationalMedicine发表多篇论文。手术疾病模型精选案例1.心肌梗死模型(左冠状动脉结扎术)与缺血再灌注损伤模型2.主动脉弓缩窄3.慢性心力衰竭模型赛业生物可提供的小动物手术疾病模型及相关服务心脑血管系统手术心肌梗死模型(左冠状动脉结扎术)心脏缺血再灌注损伤模型主动脉弓缩窄术(TAC)升主动脉缩窄术腹主动脉缩窄术(模型)心力衰竭模型肺动脉高压模型大脑中动脉栓塞。骨质疏松症是以骨量减少及骨组织微观结构为特征的一种全身性骨骼疾病,伴有骨的脆性增加、易于发生骨折。宁夏C57动物模型建模
控制原发病,遏制其诱导的全身失控性炎症反应,是预防和ALI/ARDS的必要措施。江苏实验动物模型服务
中风模型)股动脉内皮损伤模型颈动脉结扎或部分结扎术深静脉血栓模型下肢缺血模型门腔静脉分流术左、右心血流动力学测试左心系统测压右心系统测压腹部手术胆管结扎术胃大部切除术小肠部分切除术急性肾衰模型单侧肾切除术3/4肾切除术5/6肾切除术脾切除术肾上腺切除术肾上腺髓质摘除术骨关节炎模型脾神经切除术肝脏迷走神经切断术胃迷走神经切断术膈下迷走神经切断术去势术输精管结扎术卵巢切除术单侧或双侧输卵管结扎术子宫切除术输尿管结扎术神经系统手术单侧脑内定位插管双侧脑内定位插管侧脑室导管侧脑室微量渗透泵导管第3脑室插管腓肠肌神经切除术软组织手术甲状腺切除术甲状旁腺切除术甲状腺切除术伴甲状旁腺再植入术胸腺切除术松果体切除术垂体切除术传感器植入手术血压遥测左心室压遥测门静脉压遥测血压与心电图遥测血压与脑电图遥测胸内压遥测胸内压与心电图遥测心电图遥测脑电图遥测肌电遥测心电图与脑电图遥测脑电图与肌电遥测血糖遥测体温与活动度遥测血管导管手术颈动脉导管颅内给药颈动脉导管腹主动脉导管股动脉导管股静脉导管单侧颈静脉导管双侧颈静脉导管门静脉导管下腔静脉导管非血管导管手术胆管导管胃导管十二指肠导管空肠导管回肠导管盲肠导管结肠导管膀。江苏实验动物模型服务