所用仪器为bio-rad的化学发光凝胶成像系统。结果见图1中c和d，可以看出，通过免疫印迹(westernblot)的方法证明了gm20541蛋白在小鼠脑、肝脏、视网膜、心脏、肾脏以及脾中均有表达。实施例2本实施例以小鼠为目标动物，对本发明提供的视网膜色素变性疾病模型的构建方法进行说明，gm20541基因敲除的路线如图2所示，具体操作如下：基因敲除小鼠获取步骤：1将与小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有报告基因gfp的表达框、有neo抗性基因的表达框、两端有同向排列loxp位点的第3外显子和3’端臂克隆到bac载体(图2)以用于替换欲敲除的gm20541基因第3个外显子；2利用dna同源重组技术将gm20541基因中的第3个外显子替换，得到gm20541基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞；3利用步骤2得到的胚胎干细胞制备得到含gm20541基因敲除细胞的嵌合体小鼠(图2)；4将步骤3得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选出gm20541基因敲除的杂合子小鼠(图2)。鉴定：实施例2中长距离pcr鉴定阳性子一代鼠的实验结果，扩增5’端长臂使用引物对gm5’lrf和sa3’r，扩增产物为。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。结果见图3中a。通过高脂饮食诱导构建非酒精性脂肪肝模型。上海C57动物模型饲养
技术实现要素：本发明的目的在于提供利用gm20541基因构建视网膜色素变性疾病模型的方法和应用，采用该构建方法可以得到视网膜色素变性疾病模型，该模型可表现出视网膜色素变性性疾病特征，该模型可用于视网膜色素变性性疾病的研究，可以帮助阐明rp的发病过程及机制，并为该疾病的或预防提供新的靶标。本发明是这样实现的：方面，本发明实施例提供了一种利用gm20541基因构建视网膜色素变性疾病模型的方法，其包括：敲除目标动物视网膜前体细胞中的基因组中的gm20541基因。江苏动物模型饲养SD大鼠脑缺血模型建立。
本实用新型属于动物实验设备技术领域，具体涉及一种高原性人类疾病模型制备环境模拟系统。背景技术：高原环境模拟系统可以在非高原地区“制造”出不同海拔高度和气候条件，模拟各种高原缺氧环境，使实验动物在一定时间内根据实验需求达到预期的高原反应症状，使实验动物表现出高原性疾病，为高原疾病研究人员提供高原疾病模型动物，便于研究或预防高原性疾病的药物。现有的环境模拟系统可以模拟实现高原光照和低氧环境，但模型成功率较低、动物死亡率较高、造模动物种类单一。技术实现要素：本实用新型的目的在于：提供一种高原性人类疾病模型制备环境模拟系统，解决现有高原环境模拟系统中存在的模型成功率较低、动物死亡率较高、造模动物种类单一的问题。本实用新型采用的技术方案如下：一种高原性人类疾病模型制备环境模拟系统，包括功能设备集成底座和设置在功能设备集成底座上的饲养仓，所述饲养仓具有无极调控微负压装置、高原低氧环境模拟装置、高原光照环境模拟装置、高原温度环境模拟装置、高原湿度环境模拟装置、动物行为学远程观察单元，所述饲养仓内设置有若干代谢笼，饲养仓前后箱体上设置有观察窗和若干操作窗。
表明在gm20541敲除鼠视网膜外节变短退化。sixko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4,6-diamidino-2-phenylindole)：细胞核染料4,6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：视紫红质抗体；merge：两种颜色重叠。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。实施例11采用rt-pcr方法检测gm20541基因在不同组织的表达情况。方法：分别提取小鼠脑、肝脏、视网膜、肠、肌肉、心脏、肾脏以及脾的总rna，然后用cdna合成试剂盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根据gm20541的cdna序列设计引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3。以提取的cdna为模板，进行rt-pcr。扩增后进行电泳，结果见图1。结果见图1中a和b，可以看出，通过rt-pcr方法检测gm20541基因在小鼠脑、肝脏、视网膜、肠、肌肉、心脏、肾脏以及脾中的表达。动物模型的优越性主要表现在以下几下方面。
e：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的暗适应视网膜电图b波统计；scotopicamplitude：暗光测定峰值；flashintensity：闪光强度；a-wave：a波；b-wave：b波。图6：光适应视网膜电图(erg)检测结果；图中：a-b：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图轨迹图；c：20cd·s/m2光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应闪烁(flicker)视网膜电图轨迹图；d：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图a波统计；e：不同光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应视网膜电图b波统计；f：20cd·s/m2光强下gm20541基因敲除小鼠的光适应闪烁(flicker)视网膜电图统计。sixko或cko表示gm20541基因敲除纯合子小鼠；ctr是指野生型；het是指杂合子。图7：视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠视网膜切片免疫组化染色结果；小鼠年龄：4个月；os：outer-segment(外节)；is：inner-segment(内节)；onl：outernuclearlayer(外核层)；inl：innernuclearlayer(内核层)；图中：a：视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠视网膜石蜡切片的h&e染色结果，外核层及内核层均变薄；b：对不同部位的gm20541敲除鼠视网膜外核层厚度统计。图8：视网膜前体细胞特异敲除gm20541基因小鼠ihc染色结果。（arteriosclerosis，AS）是一种缓慢进行性疾病，严重影响人类健康。北京兔动物模型服务
慢性阻塞性肺疾病是一种具有气流阻塞特征的慢性和（或）肺气肿。上海C57动物模型饲养
用一次定量放血法可摆分之摆造成出血性休克，摆分之摆死亡，这就符合可重复性和达到了标准化要求。(三)可靠性复制的动物模型应该力求可靠地反映人类疾病，即可特异地、可靠地反映某种疾病或某种功能、代谢、结构变化，应具备该种疾病的主要症状和体征，经化验或X线照片、心电图、病理切片等证实。若易自发地出现某些相应病变的动物，就不应加以选用，易产生与复制疾病相混淆的疾病者也不宜选用。(四)适用性和可控性供医学实验研究用的动物模型，在复制时，应尽量考虑到今后临床应用和便于控制其疾病的发展，以利于研究的开展。(五)易行性和经济性在复制动物模型时，所采用的方法应尽量做到容易执行和合乎经济条件原则。以上就是上海研录为你分享的小知识，如果想要了解更多相关内容，可与我们联系，我们期待您的来电!上海C57动物模型饲养
