SYBR Green I是一种双链 DNA 结合染料,它能非特异性地嵌入双链 DNA 的小沟中。在游离状态下,SYBR Green I 发出微弱的荧光,但当它与双链 DNA 结合后,荧光信号会明显增强。在荧光定量 PCR 反应中,随着 PCR 产物的不断合成,SYBR Green I 与双链 DNA 结合,荧光信号强度不断增加,通过检测荧光强度的变化来反映 PCR 产物的量,从而实现对起始模板的定量分析。特点:能与所有双链 DNA 结合,不依赖于特定的序列,因此可用于各种 DNA 模板的定量分析,通用性强。其激发波长约为 497nm,发射波长约为 520nm,荧光颜色为绿色。但由于它非特异性结合双链 DNA,可能会对引物二聚体等非特异性产物也产生荧光信号,需要通过熔解曲线分析等方法来区分特异性产物和非特异性产物。若温度控制不准确,会导致 PCR 反应效率降低、特异性下降,产生非特异性扩增,影响荧光信号准确性;苏州QPCR荧光定量PCR仪电话

荧光定量 PCR 仪应用领域:医学检测病原体检测:可快速准确地检测血液、体液或组织样本中的病原体 DNA 或 RNA,如乙肝病毒、丙肝病毒、病毒、等,为性疾病的早期诊断和防控提供有力支持。遗传病诊断:检测与遗传性疾病相关基因的突变,辅助临床诊断和遗传咨询,如囊性纤维化、血友病、地中海贫血等疾病的基因检测。食品安全:致病菌检测:检测食品中的沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等致病菌,确保食品安全。转基因成分检测:对食品中的转基因成分进行定性和定量分析,保障消费者的知情权和选择权。苏州QPCR荧光定量PCR仪电话反应体系配置:配置反应体系时,需确保各试剂充分混合均匀,避免局部浓度不均影响反应进行。

荧光染料法原理:一些荧光染料(如 SYBR Green I)能特异性地结合到双链 DNA 上。在 PCR 反应体系中,随着 DNA 扩增产物的不断增加,与双链 DNA 结合的荧光染料也越来越多,荧光信号强度与 PCR 产物的数量呈正相关。通过检测荧光信号的强度变化,就可以实时监测 PCR 反应的进程。过程:在 PCR 反应的每一个循环中,当温度降低到退火温度时,引物与模板结合,DNA 聚合酶开始延伸引物,合成新的 DNA 链。此时,荧光染料会结合到新合成的双链 DNA 上,仪器会在特定的时间点检测荧光信号的强度。随着循环次数的增加,荧光信号逐渐增强,当信号强度达到设定的阈值时,对应的循环数被称为阈值循环数(Ct 值)。定量依据:在一定的范围内,起始模板量与 Ct 值呈对数关系。即起始模板量越多,达到阈值所需的循环数越少,Ct 值越小;反之,起始模板量越少,Ct 值越大。通过已知浓度的标准品建立标准曲线,再根据待测样本的 Ct 值,就可以在标准曲线上计算出其对应的起始模板量。
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