特发性肺纤维化（IPF）小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉，6-8周龄，体重20~25g，仰卧固定于实验台上，颈部去毛后酒精消毒，切开皮肤，逐层暴露气管；2、将1mL注射器经两气管软骨环间隙朝向心端刺入气管，回抽无阻力；3、注入博莱霉素（约4~5mg/kg）再向气管内注入～3次，使药物在肺部分布均匀；4、以大鼠身体长轴为中心，正反快速旋转鼠板1～2分钟。缝合皮肤，局部聚维酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止，室温保持在24～25℃，待动物自然清醒后置笼内常规饲养。肺纤维化模型发展时间：2周可见肺系数(肺重/体重×100％)、羟脯氨酸含量明显升高。显微镜下可见炎症细胞浸润，以淋巴细胞、单核吞噬细胞为主，并有肺泡壁增厚、成纤维细胞增生等Ⅱ级肺泡炎表现。4周可见肺间质内有大量散在绿染的胶原纤维，肺泡结构破坏，见有许多纤维细胞等Ⅲ级肺间质纤维化病变。大鼠模型病理组织学与病理生理学改变与人类肺间质纤维化相似。其病变早期表现为渗出性肺泡炎，炎症细胞在病变处聚集增多。晚期为肺间质纤维化，间质细胞增生，基质胶原聚集取代正常的肺组织结构。【检测】组织病理切片HE染色。胆管结扎致肝胆管性肝硬化大鼠模型。江苏皮下成瘤动物模型
实验样本分类实验一般采取样本有：血液样本、组织样本和细胞样本。通常，组织样本采集后，应立即用等渗溶液（PBS或生理盐水）尽量把血液漂洗干净（除非血液也是分析对象），用滤纸或纱布吸干，把样本分切成几分，每份的体积约2个黄豆大小，每份用一个管子装。血液样本的采集应根据不同实验的要求，将会采取不同策略。血清样本：全血中不加抗凝剂，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黄色透明液体。（全血标本室温放置2小时3000rpm/min离心15min）血浆样本：全血中加抗凝剂，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黄色透明液体。（可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃，3000rpm/min离心15min）如果是做生化\ELISA等检测可以考虑血浆和血清，根据获得的样本量可考虑分装成100-500μl/管，可避免反复冻融造成的检测误差。生化：建议优先选择血清，其次选择肝素抗凝血浆；ELISA：建议优先选择血清，其次选择肝素或EDTA抗凝血浆；凝血实验：只能选择枸橼酸钠抗凝血浆；血常规：只能选择EDTA抗凝全血；如果要收集其中的白细胞、血小板等建议用抗凝全血。如果要做流式建议用专门的流式用血液收集管，防止表面抗原的丢失，或者尽快安排就近检测。样本处理取样完后。西藏实验动物模型手术用血管内线栓阻断法制备大鼠 MCAO模型。已被脑血管病研究者接受和采用。
静置25分钟后把酒精倒干，用吸水纸吸出多余的酒精，然后配压缩胶，同样的操作，关键是梳子要插得快，要小心梳子下产生气泡，然后静置30分钟。如果是当天跑胶，我会等上层胶凝2个小时再用，但要注意防干燥缩水，可以在一个小时的时候沿着梳子上缘加点电泳液。所以我一般提前一晚制胶，泡于纯水或者电泳液里置于4度冰箱暂存。三、蛋白电泳1、上样前准备把胶组装到电泳芯上，注意密闭性(否则漏液)，如果内槽漏液就不是匀强电场了，条带可能就不是一条直线。然后内槽倒满电泳液，拔梳子，这一步要小心，梳子要两边一起缓缓往上拔出，然后观察泳道内有无脱落的胶粒或者胶丝，有的话用1毫升注射器吸出。然后从冰箱取出蛋白样品，解冻。准备振荡器。2、上样和电泳注意，上样后蛋白会开始慢慢在胶中弥散，所以上样越快越好。我习惯先上蛋白Marker,再上蛋白样品，蛋白上样前确保样品完全解冻和充分振荡(推荐使用振荡器振荡)，吸的时候没有拉丝即可，建议上样分钟把样品从冰上取出来，不然样品中SDS可能会结晶析出，从而影响电泳效果。上层胶80V25分钟，下层胶120V65分钟。四、转膜1、转膜前准备我会在电泳结束0分钟准备，把转膜液配好置于4度冰箱预冷，然后裁膜，准备转膜装置。
根据gm20541的cdna序列设计引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3；(g)以提取的cdna为模板，进行rt-pcr。扩增后进行电泳。结果见图4中b，可以看出，通过rt-pcr方法检测gm20541在gm20541基因敲除纯合子小鼠的视网膜中表达量降低。图4的b中ctrl是指野生型对照，sixko是指gm20541基因敲除纯合子小鼠；gm20541rnalevel是指rna表达水平相对变化，以野生型表达水平为1。实施例3对4月龄的gm20541基因敲除纯合子小鼠进行erg视力检测：1暗适应动物应整夜暗适应，环境应做到没有光线；2次日麻醉：称重，腹腔内注射；宜深度麻醉；3动物固定及散瞳：麻醉完成后，在暗红光照明下将小鼠用胶带固定在动物试验平台的前方：需保证小鼠正"趴"，即相对于闪光刺激器的刺激口，双眼高度一致，充分暴露，滴加散瞳剂。4电极安装：将视网膜电图仪(espionvisualelectrophysiologysystem,diagnosysllc,littleton,ma,usa)预热后，在耳夹电极涂上导电膏，夹尾巴，插入放大器“地”接口；双头的针电极插入后颈皮(大约在两耳中间)，同时接两个通道的“负”接口；金环电极夹在动物实验平台的电极支架上，仔细调整其角度。APOE-/-鼠左颈动脉结扎糖尿病模型。
轻微的接触角膜的中心顶端。一通道正极接右眼，二通道正极接左眼。通过针管对双眼滴生理盐水，改善金环电极及角膜的接触效果。保证两个金环电极以相同的角度、方式接触两眼角膜中心正端的相同位置。5记录示波信号确认无误后，关闭暗红光。可以先尝试记录一下暗适应光强为·s/m2的erg检测，确认一下信号的质量：如果双眼的振幅出现了与预期不同的较大差异，建议再次检查金环电极的安装位置。然后依次记录暗适应光强为·s/m2的信号。需要注意的是，完成暗适应·s/m2光强检测后，系统将自动打开背景光。同样的，需要打开定时器，光适应10-15分钟，再记录。6经过光适应后，依次记录光适应·s/m2以及·s/m2光强下波形，记录·s/m2光强下闪烁视网膜诱发电位。结果发现在4个月时，与ctrl(对照)小鼠比较，cko(gm20541基因敲除纯合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗适应和光适应条件下均明显降低，表明gm20541敲除后导致视力受损(见图5和图6)。实施例4视网膜石蜡切片h&e染色：对4月龄小鼠的视网膜进行石蜡切片、苏木精-伊红染色法(h&e染色方法)染色，具体操作如下：1)快速取小鼠眼球组织，并置于固定液中固定24h；2)石蜡包埋，切片，厚度为4μm；3)切片常规用二甲苯脱蜡。卵巢切除致骨质疏松大鼠模型。江苏皮下成瘤动物模型
慢性阻塞性肺疾病是一种具有气流阻塞特征的慢性和（或）肺气肿。江苏皮下成瘤动物模型
转基因小鼠对黑色素瘤发生的分子途径的理解有重要意义。此外，转基因小鼠是可靠且可重现的模型，用来评估受损基因对黑色素瘤生物学的影响。应用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因组改变在黑色素瘤的发生和发展的重要性及药物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一种富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，为胶原原纤维形成的关键调节剂。黑色素瘤中Lumican表达降低与浸润相关。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物导入胚胎干细胞，建立Lum－/－转基因小鼠。该模型可提供与发生和转移相关机制及可见变的进展，以及确定负责的黑色素瘤进展的基因。2Tyr::N-RasQ61K转基因小鼠方法：有研究者使用突变的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K构建体，并注射到卵母细胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K转基因小鼠。3BrafV600E转基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重组酶技术从内源性Braf基因中诱导BrafV600E表达，建立BrafV600E转基因黑色素瘤小鼠模型。总结目前已有三种不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于实验动物与人类基因组、基因调控、细胞类型、结构与组成等方面是有一定差别。江苏皮下成瘤动物模型
