T7EndonucleaseI(T7EI)是一种特殊的DNA内切酶,具有以下特点:1.**识别错配DNA**:T7EI能够识别并切割不完全配对的DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。2.**切割位点**:T7EI切割错配位点5'端的、第二或第三个磷酸二酯键。3.**灵敏度**:T7EI对错配DNA的识别非常灵敏,能够检测并切割单碱基和多碱基的错配。4.**应用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因编辑技术导致的基因突变的鉴定。它通过识别错配DNA来帮助鉴定基因编辑是否成功以及是否有非目标效应。5.**直接电泳检测**:T7EI的产物可以直接通过电泳进行检测,这使得它在实验操作中更为方便。6.**来源**:T7EI来源于大肠杆菌菌株,是一种麦芽糖结合蛋白(MBP)和T7核酸内切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:尽管T7EI在商业上使用时成本较高,但它在大规模样本测试中,尤其是在基因突变鉴定方面,提供了一种有效的筛选方法。8.**特殊注意事项**:T7EI能够识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA,但不能识别1bp的插入、缺失或突变。这些特点使得T7EndonucleaseI成为基因突变鉴定中一个非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因编辑技术的应用中。CRISPR/Cas12a 是一种单一的RNA引导的核酸内切酶,通过CRISPR/Cas9系统为靶向基因组工程提供了新的机会。Recombinant Human CD3E/CD3 epsilon monomer Protein,hFc Tag

嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)和它的大片段(LargeFragment)是两种在分子生物学实验中常用的酶。它们的主要区别在于结构和活性:1.**结构**:-完整的BstDNAPolymeraseI包含一个5'→3'的核酸外切酶活性区域,而大片段是通过基因工程改造或蛋白酶处理去掉了这个外切酶活性区域的酶。因此,大片段没有5'→3'的核酸外切酶活性,但保留了5'→3'的DNA聚合酶活性。2.**活性**:-BstDNAPolymeraseI具有5'→3'的核酸外切酶活性,这意味着它在合成DNA的同时可以“校对”错误,切除不匹配的核苷酸。而大片段由于缺少外切酶活性区域,不具有这种校对能力。-大片段具有更强的链置换能力,这使得它非常适合于等温扩增反应,如环介导的等温扩增(LAMP)和滚环扩增(RCA)。3.**应用**:-BstDNAPolymeraseI由于具有校对功能,可能更适合于需要高保真度的DNA合成反应。-BstDNAPolymerase,LargeFragment由于其链置换能力,更适合于等温扩增技术,这些技术不需要热循环仪,可以在恒定温度下进行DNA扩增。4.**热稳定性**:-BstDNAPolymerase,LargeFragment通常在65°C左右的温度下进行反应,而BstDNAPolymeraseI可能具有更宽的反应温度范围。Dynorphin A(1-13),porcine泛素蛋白的C末端通常通过酰胺键与靶蛋白的氨基团连接在一起,最常见的是与靶蛋白赖氨酸的ε氨基团相连。

BsuDNAPolymerase(嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶)在PCR中的应用具有多个优势,以下是一些关键点:1.**链置换活性**:BsuDNAPolymerase具有很强的链置换活性,这使得它非常适合于等温扩增技术,如重组酶聚合酶扩增(RPA)。在这些技术中,BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特异性地扩增模板,在10到30分钟内将痕量的核酸模板(低至单拷贝)扩增至可以检出的水平。2.**高温稳定性**:BsuDNAPolymerase在高温下保持活性,这使得它在一些需要高温反应的实验条件下表现出色。3.**高灵敏度和特异性**:BsuDNAPolymerase在等温扩增中展现出高灵敏度,能够将微量核酸模板扩增到可检测水平。同时,它也具有高特异性,减少了非特异性扩增的风险。4.**简化的样品处理**:BsuDNAPolymerase可以直接对复杂样品进行扩增,无需事先进行复杂的核酸纯化和提取步骤,节省了时间和成本。5.**可扩增DNA和RNA**:BsuDNAPolymerase不仅可以扩增DNA,还可以直接扩增RNA,省去了额外的逆转录反应(cDNA合成)步骤,这对于RNA的检测和分析更加方便快捷。6.**无核酸外切酶和RNase残留**:BsuDNAPolymerase在生产过程中确保无核酸外切酶、切口酶及RNase残留,这有助于提高实验的准确性和重复性。
5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能够从DNA链的5'端向3'端切除核苷酸的能力。这种活性通常用于修复受损的DNA或去除错误配对的核苷酸。具体来说,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成过程中切除前方的核苷酸,帮助错误或不需要的序列,从而确保DNA的正确复制和修复。在DNA聚合酶中,5'-3'外切核酸酶活性与聚合酶活性相辅相成。聚合酶在合成新链时,5'-3'外切酶活性可以在发现错误时进行修正,确保合成的DNA链的准确性。例如,E.coliDNA聚合酶I具有这种外切酶活性,可以在合成过程中去除错误的核苷酸,从而提高DNA的保真度。需要注意的是,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,这使得它在某些应用中更为稳定,特别是在等温扩增反应中,如LAMP(环介导等温扩增)和RCA(滚环扩增)等。Cas12a不仅具有顺式切割活性,还具备独特的反式切割活性,这使得它能够无差别地裂解附近的单链DNA。

核酸内切酶VIII(EndonucleaseVIII)是一种来自大肠杆菌的DNA损伤修复酶,具有以下特点:1.**双功能活性**:核酸内切酶VIII具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。2.**释放受损嘧啶碱基**:N-糖基化酶活性可以释放双链DNA上受损的嘧啶碱基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,生成一个脱嘌呤(apurinic,AP)位点。3.**切割AP位点**:AP裂解酶活性可以切割AP位点的3'和5'端,产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。4.**识别并切除受损碱基**:核酸内切酶VIII可以识别并切除多种受损碱基,包括尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二氢胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲。5.**与EndonucleaseIII的区别**:虽然核酸内切酶VIII与核酸内切酶III相似,但核酸内切酶VIII具有β和δ裂解酶活性,而核酸内切酶III具有β裂解酶活性。6.**应用领域**:核酸内切酶VIII可以应用于单细胞凝胶电泳、NGS建库中DNA损伤修复、酶法合成DNA中释放DNA链、碱洗脱,搭配尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)进行含U片段的克隆等。
One Step RT-qPCR SYBR Green Kit 是一种用于实时荧光定量PCR的试剂盒,它结合了反转录和PCR扩增步骤。Recombinant Human CD3E/CD3 epsilon monomer Protein,hFc Tag
蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一种特殊的融合蛋白,它结合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些关键特点和应用:1.**融合表达产物**:pA-MNase是蛋白A与微球菌核酸酶MNase的融合表达产物,因此它同时具有ProteinA的抗体结合活性和MNase的核酸内切酶活性。2.**双重功能**:由于其双重功能,pA-MNase常用于蛋白质-DNA相互作用研究,特别是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技术中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的细胞壁表面蛋白,分子量为42kDa,能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)结合,通常结合部位为免疫球蛋白的Fc区。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一种核酸内切酶,能够降解核酸,常用于降解蛋白质制备中存在的核酸,减少细胞裂解液的粘度,以及用于染色质结构分析和快速RNA测序。5.**反应条件**:MNase的反应条件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要补充100µg/ml重组白蛋白,分子生物学级,并在37°C下孵化。Recombinant Human CD3E/CD3 epsilon monomer Protein,hFc Tag
重组人TNFSF12蛋白(hFcTag)是一种在哺乳动物细胞中表达的重组蛋白,融合了hFc标签,便于纯化和检测。TNFSF12(TumorNecrosisFactorSuperfamilyMember12),也称为TWEAK(TNF-likeweakinducerofapoptosis),是TNF超家族的重要成员,广参与免疫调节、细胞存活、炎症反应和组织修复。它在多种生物学过程中发挥关键作用,尤其是在免疫细胞的启动和组织损伤后的修复过程中。TNFSF12的功能与机制TNFSF12通过其胞外区与受体TNFRSF12A(也称为TWEAKR或Fn14)结合,启动下游的信号通路。TNFSF12的信号转...