Recombinant Mouse PRLR Protein

PreScissionProtease（PSP）是一种在蛋白质纯化和分析中使用的酶，具有以下特点：1.**特异性识别**：PSP能在低温（4°C）下特异性识别八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly之间进行酶切。2.**应用**：PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等标签，有助于纯化目的蛋白。3.**纯度高**：PSP的纯度达到95%以上，确保了实验的准确性和重复性。4.**稳定性好**：PSP在含有50%甘油的储存缓冲液中，-80℃长期储存，有效期2年；小量分装-20℃保存，有效期6个月。5.**酶活定义**：在5℃条件下反应16小时，能够切割100μg的GST标签蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。6.**兼容性强**：PSP的酶切体系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40，10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事项**：某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin会抑制PSP的酶活性50%以上。8.**优化酶切效率**：建议进行预实验摸索实验浓度，实际操作中，建议酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。泛素连接酶E3识别特定的靶蛋白，并促进E2上的泛素转移到靶蛋白的赖氨酸残基上，形成泛素化标记。Recombinant Mouse PRLR Protein,His Tag

确保N末端His标签的泛素蛋白在实验中的活性和稳定性，需要考虑以下几个关键因素：1.**储存条件**：按照生产商的建议，将重组泛素蛋白冻干粉储存在-25~-15℃的条件下，以保持其稳定性和活性。2.**避免反复冻融**：多次冻融会降低蛋白质的稳定性和活性。建议在使用后将剩余的蛋白质分装并储存在推荐的条件下。3.**复溶条件**：按照产品说明，使用无菌蒸馏水或推荐的缓冲液将蛋白质复溶至适当的浓度。通常建议添加0.1%BSA以增加蛋白质的溶解度和稳定性。4.**使用前离心**：在使用前，将蛋白质溶液短暂离心，以确保所有组分都沉积在底部，避免取样时的不均匀性。5.**工作浓度和体积**：根据实验设计，将蛋白质稀释至工作浓度，并尽量使用小体积以减少蛋白质的降解。6.**避免蛋白降解**：在实验过程中，使用蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解酶对重组泛素蛋白的降解。7.**避免氧化**：在蛋白质的储存和使用过程中，避免氧化，可以通过添加抗氧化剂如DTT或TCEP。8.**避免污染**：使用无菌技术操作，确保实验器材和环境的清洁，避免微生物污染。9.**操作环境**：在4℃或冰上进行操作，以减少蛋白质降解和非特异性相互作用。Recombinant Human CB1 Protein-VLP去泛素化酶可以去除泛素化标记，这一步骤是泛素化过程的逆转过程，它允许细胞对泛素化事件进行精细调控。

PNGaseF（肽-N-糖苷酶F）是一种普遍使用的酶，它可以从N-连接糖蛋白中去除几乎所有类型的N-连接糖链。其活性和稳定性可能会在不同的pH条件下发生变化。根据NEB（NewEnglandBiolabs）提供的PNGaseF产品信息，PNGaseF的好的活性和稳定性pH为7.5。在pH7.5时，PNGaseF的活性可以达到100%。然而，酶在不同温度下的活性表现也有所不同：在37°C时活性为100%，在30°C时也保持100%，而在23°C时活性下降到65%，17°C时为40%，在3°C时几乎无活性。这表明PNGaseF的活性随温度降低而下降，尽管pH值对酶活性有重要影响，但温度也同样是一个重要因素。此外，PNGaseF的活性会受到SDS的抑制，因此在变性条件下进行酶切时，反应混合物中必须包含NP-40，以1:1的比例存在，以抵消SDS的抑制作用。对于非变性条件下的酶切，可能需要更多的酶和更长的孵育时间。在实验操作中，为了确保PNGaseF的好的活性，建议按照制造商提供的推荐缓冲液和条件进行实验。如果需要在不同的pH条件下使用PNGaseF，可能需要通过实验优化来确定好的条件。

重组的化脓性链球菌Cas9蛋白（SpCas9）是一种用于基因组编辑的核酸酶。它是CRISPR-Cas系统的一部分，该系统是一种细菌和古菌的适应性免疫防御机制，能够识别并切割入侵的外源核酸。Cas9蛋白在CRISPR系统中起到关键作用，它能够识别特定的原间隔子相邻基序（PAM），在引导RNA（gRNA）的引导下与目标DNA结合并进行切割。SpCas9蛋白由1053个氨基酸组成，相对较小的体积使其便于在体内递送，因此它在多种生物中都能进行有效的基因组编辑。为了提高SpCas9的表达量和溶解度，研究人员采用了多种策略，例如使用GB1促溶标签和多重启动子策略，这些策略可以显著提高蛋白的产量和活性，同时保持其功能活性不受影响。在基因编辑过程中，SpCas9与gRNA形成稳定的核糖核的蛋白（RNP）复合物，通过gRNA与基因组DNA的序列匹配来识别目标位点，并在距离NGGPAM序列3个碱基以内的位置切割DNA。为了增强SpCas9的基因组编辑效率，研究人员还开发了嵌合融合蛋白，例如与5’至3’核酸外切酶重组J(RecJ)或GFP融合的SpyCas9蛋白，这些嵌合蛋白可以显著提高靶向基因编辑效率，同时保持较低的脱靶效应。

使用PreScissionProtease进行蛋白质切割后，可以采用以下方法来提高产品的纯度：1.**亲和层析**：利用GST标签或His标签等进行一步或多步亲和层析，以高纯度分离目的蛋白。2.**离子交换层析**：根据蛋白质的电荷特性，使用阳离子或阴离子交换层析进一步纯化蛋白质。3.**凝胶渗透层析**：通过分子大小的排阻，去除分子量较大或较小的杂质。4.**反向层析**：使用反相高效液相色谱（HPLC）技术，根据蛋白质与固定相的疏水相互作用进行分离。5.**超滤/透析**：使用超滤膜或透析袋去除低分子量的杂质，如盐分、缓冲液成分或小分子蛋白质。6.**二次亲和层析**：在初次亲和层析后，可以进行二次亲和层析以进一步提高纯度。7.**蛋白质纯化柱**：使用商业化的蛋白质纯化柱，如GST-Sepharose或Ni-NTA柱，进行快速纯化。8.**等电聚焦电泳**：通过等电聚焦电泳（IEF）分离具有不同等电点的蛋白质。9.**SDS-PAGE**：使用SDS-PAGE凝胶电泳分析蛋白质的纯度，并可通过凝胶切片回收相对纯净的蛋白质条带。10.**质谱分析**：利用质谱技术鉴定蛋白质的确切质量和序列来确保蛋白质的纯度和正确性。在泛素化过程中，首先泛素激起酶E1（Uba1或其他）在ATP的存在下激起泛素分子，形成E1-泛素硫酯中间体。Endo S糖苷内切酶S

Cpf1是一种新发现的类2/型V CRISPR-Cas DNA内切酶，在不同系统中显示出一系列的活性。Recombinant Mouse PRLR Protein,His Tag

EndoS，即糖苷内切酶S（Endo-S），是一种具有高度特异性的酶，它在生物化学研究中有着重要应用，尤其是在糖蛋白和抗体药物偶联物（ADCs）的研究中。以下是EndoS的一些关键特点：1.**特异性**：EndoS能够特异性地识别并切割N-连接糖链的壳二糖结构，即在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间的连接处进行切割。2.**应用**：在制备糖链定点ADC化合物中，EndoS被用于将小分子细胞毒药物“一步”定点连接到抗体糖基化位点，提供了一种重要的技术方法。3.**兼容性**：EndoS对多样化的LacNAc修饰显示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基团、荧光基团等衍生物作为底物，实现抗体糖基化修饰。4.**活性**：EndoS的活性对多肽没有严格的要求，可以接受蛋白质、肽、天门冬酰胺或游离聚糖作为底物。但是，对于具有三、四个支链的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，EndoS没有活性。5.**产品形式**：EndoS通常以带有His标签的形式存在，便于从反应中去除，这在实验操作中提供了便利。6.**研究进展**：EndoS在去糖基化方法研究中是一个重要的工具，特别是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的结构和功能时。