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广州细胞培养支原体检测方法恒温扩增

支原体污染和黑胶虫污染是两种不同类型的细胞培养污染，它们具有各自的特点和区别：支原体污染：在相差显微镜下，...

支原体基本参数

品牌
世途科生物
型号
CM0001

支原体企业商机

支原体污染和黑胶虫污染是两种不同类型的细胞培养污染，它们具有各自的特点和区别：

支原体污染：在相差显微镜下，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。

黑胶虫污染：在高倍镜下，被黑胶虫污染的细胞膜会变得模糊不清，边界不清晰，有粗糙感。

污染的影响：

支原体污染：可能导致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落，影响细胞的DNA、RNA及蛋白表达。

黑胶虫污染：与细胞竞争性生长，开始时对细胞没有什么影响，但当数量多时，细胞生长会受到影响直至死亡。

污染的来源：

支原体污染：可能来源于工作环境的污染、操作者本身、培养基的污染、交叉污染、实验器材带来的污染以及用来制备细胞的原始组织或部位的污染。

黑胶虫污染：可能来源于细胞本身的污染或从动物取材时的污染，也可能通过培养箱空气进行污染。

细胞被支原体污染了会有什么影响？广州细胞培养支原体检测方法恒温扩增

LAMP法，即环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification），是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。它由日本学者Notomi于2000年开发。LAMP法检测有以下特性：

快速高效：LAMP技术可以在1小时内把几拷贝的目的序列迅速扩增到10^9^～10^10^拷贝，扩增效率高。

简便性：LAMP技术不需要进行模板的预变性，减少了PCR技术升降温带来的影响以及对昂贵、精密实验仪器的要求，同时扩增效率高，可以在较短时间内完成检测。

LAMP法因其快速、高效、特异、灵敏和经济等优点，已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域，并且还将广泛应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域，具有更为广阔的发展应用前景。

细胞培养支原体预防支原体及污染方式有哪些？

支原体去除的实验步骤通常包括以下几个阶段：

1. 支原体检测：在进行去除之前，首先要确认细胞培养物是否受到支原体污染。这可以通过多种方法实现，如PCR法、LAMP法或支原体培养法。

2. 选择合适的去除试剂：一旦确认存在支原体污染，需要选择一种有效的去除试剂。

3. 去除试剂的添加：根据去除试剂的说明书，将试剂添加到受污染的细胞培养基中。通常，这涉及到将一定比例的去除试剂加入到细胞培养液中。

4. 孵育：添加去除试剂后，将细胞培养物放回培养箱中孵育。孵育时间和条件（如温度、CO2浓度）应根据试剂的推荐进行调整。

5. 监测去除效果：在孵育过程中，定期监测细胞的状态和去除效果。这可能包括观察细胞形态、生长速率的变化，以及通过显微镜检查是否有支原体存在的迹象。

6. 后续检测：去除过程完成后，再次使用支原体检测方法确认污染是否已被成功。

目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中，其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样，主要来源包括实验室人员、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外，来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂；非无菌供应品、培养基和溶液；实验室人员；培养箱；液氮；空气颗粒和气溶胶；抗*素的过度使用；细胞培养器皿的不正确密封；以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
支原体污染如何预防？

检测新鲜培养基是否有支原体污染，可以采用以下五种方案：

1. 培养法：这是一种传统且可靠的方法，通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上，观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时，但成本较低。

2. 荧光染色法：使用特定的荧光染料（如Hoechst 33258）对细胞进行染色，然后在荧光显微镜下观察。如果存在支原体污染，可以看到细胞表面或细胞间隙中支原体DNA的荧光染色。

3. PCR法：通过设计针对支原体特定序列的引物，利用PCR技术特异性扩增目标DNA。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，如果出现条带则表明存在支原体污染。

4. 电镜观察法：使用电子显微镜直接观察培养细胞中的支原体污染情况。这种方法可以提供直观的支原体形态信息，但设备要求较高。

5. 一步法恒温支原体检测：使用特定的试剂盒，如Yeasen一步法恒温支原体检测试剂，采用等温扩增技术，通过颜色变化（由蓝紫色变为天蓝色）进行快速检测。

支原体检测实验的方法？温州支原体去除货期

支原体检测方法LAMP法？广州细胞培养支原体检测方法恒温扩增

细胞培养中支原体污染的检测方法有多种，以下是一些常用的检测手段：

1. 显微镜检测：通过相差显微镜观察细胞，支原体在细胞表面和细胞之间会呈现为暗色微小颗粒。

2. 荧光染色法：使用荧光染料Hoechst 33258与DNA特异性结合，使支原体的DNA着色，然后在荧光显微镜下观察。染色后的支原体会在细胞周围或附于细胞膜表面显示为亮绿色小点。

3. 电镜检查：使用扫描电镜或透射电镜观察，这是一种简便快速的方法。

4. 聚合酶链反应（PCR）：使用特定的引物对支原体DNA进行扩增，是一种高灵敏度的检测方法。

5. 等温扩增法：基于LAMP技术，室温反应后观察颜色变化确认是否有支原体污染。

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