南京细胞培养支原体预防试剂「上海世途科生物科技供应」

支原体基本参数

品牌
世途科生物
型号
CM0001

支原体企业商机

方法	灵敏度	优势	劣势
培养法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金标准	ü 费劳力 ü 耗时长 ü 需要特定的培养基 ü 特定支原体种类需要特定的培养基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属 ü 可能假阳性可能性
间接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易检测	ü 费时 ü 需要细胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客观，易判读结果 ü 可以鉴别支原体种属	ü 受抗体限制 ü 价格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可检测支原体种属 ü 价格略高	ü 可检测的支原体种属有限
放射自显影	☆☆	ü 迅速	ü 难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属 ü 费劳力
生物发光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特异性	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特异性 ü 结果可靠 ü 高通量	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 无需DNA提取 ü *需10min左右的实验操作时间 ü 具有特异性 ü 高通量	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性支原体污染源和主要类型？南京细胞培养支原体预防试剂

目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中，其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样，主要来源包括实验室人员、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外，来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂；非无菌供应品、培养基和溶液；实验室人员；培养箱；液氮；空气颗粒和气溶胶；抗*素的过度使用；细胞培养器皿的不正确密封；以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
上海细胞支原体污染细胞培养中污染了支原体会怎么样？

支原体去除试剂使用后，对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体，而对真核细胞几乎没有影响。然而，某些情况下，去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响，尤其是在去除剂作用期间。此外，如果去除剂的效果不彻底，可能会导致细胞再次被支原体污染。

需要注意的是，某些支原体去除试剂可能会在去除支原体的过程中导致支原体膜溶解，从而释放出支原体的DNA，这可能会在随后的支原体核酸检测中引起假阳性结果。因此，在去除支原体后，建议在继续正常传代培养几代细胞后再进行支原体检测，以确保检测结果的准确性。

支原体预防的实验步骤主要包括以下几个方面：

1. 无菌操作技术：在细胞培养过程中，严格遵守无菌操作规程，包括穿戴适当的实验服、手套，使用无菌工具和耗材。

2. 环境控制：保持实验室环境清洁，定期消毒工作台和实验室表面，使用层流罩或生物安全柜进行细胞操作。

3. 细胞培养基和试剂的无菌过滤：所有加入到细胞培养基中的试剂和补充物，如血清、抗*素等，都应通过无菌过滤以去除支原体。

4. 细胞培养基和试剂的检测：在添加到细胞培养物之前，对新的细胞培养基和试剂进行支原体检测，以确保它们没有被污染。

5. 定期检测：即使采取了预防措施，也应定期对细胞培养物进行支原体检测，以确保及时发现并处理潜在的污染。

6. 避免交叉污染：避免从一个细胞培养物到另一个的交叉污染，使用的移液器和工具，避免在不同细胞培养物之间重复使用。

7. 细胞培养物的筛选：使用已知无支原体污染的细胞株进行实验，或者在开始实验前对细胞株进行筛选。

8. 使用预防性试剂：在某些情况下，可以在细胞培养过程中添加特定的预防性试剂，如支原体预防剂，以降低污染风险。

支原体检测方法LAMP法的应用。

qPCR法，即定量聚合酶链式反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一种高度灵敏和特异的分子生物学技术，用于检测和定量DNA序列。在支原体检测中，qPCR法的原理主要包括以下几个步骤：

1. DNA提取：首先从待测样本中提取DNA，这可能包括细胞培养上清液或组织样本中的支原体DNA。

2. 设计特异性引物：针对支原体的保守DNA序列，如16S rRNA基因，设计特异性的DNA引物。

3. 荧光标记探针：使用荧光标记的探针，该探针与目标DNA序列互补，能够在PCR扩增过程中与扩增的DNA结合。

4. Ct值确定：Ct值（阈值循环数）是指在PCR反应中，荧光信号强度超过预定阈值的循环次数。Ct值越低，表示样本中支原体DNA的量越多。

5. 定量分析：通过标准曲线法或相对定量法，将Ct值转换为支原体DNA的定量结果。

qPCR法的优势在于其高灵敏度和特异性，能够检测到非常低水平的支原体污染，并且可以在短时间内提供结果，这对于需要快速检测的生物制品生产和细胞培养质量控制非常重要

细胞库支原体检测的必要性？南京细胞培养支原体预防试剂

支原体预防的原理是什么？南京细胞培养支原体预防试剂

支原体是一类细菌，由于缺乏细胞壁，具有灵活的膜结构。这使得支原体的形态多变，很难在高倍显微镜下识别。并且能够抵抗压力、温度、渗透压和脱水，对许多针对细胞壁合成的常见抗*素具有抗性。它们的体积非常小，直径通常在0.15~0.3μm，因此能够轻易地穿过过滤系统。支原体能在哺乳动物细胞培养中可以高浓度生长，而不引起明显的混浊或其他可见的污染迹象。

支原体通过特殊的前端细胞器与宿主细胞结合。支原体前端细胞器富含粘附素，可以附着在真核细胞上并穿透宿主细胞。支原体缺乏刚性细胞壁，可能有助于其与宿主细胞膜融合，并交换其膜和细胞质成分。支原体的对细胞的毒性包括支原体侵袭性、分泌的致病酶和一些膜成分等都能够有效地侵犯宿主。

南京细胞培养支原体预防试剂

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