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免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。
基本原理
免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质(抗原)之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体,可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。
免疫沉淀技术有多种类型,包括:
1. 个别免疫沉淀法(Individual IP)
2. 免疫共沉淀法(Co-IP)
3. 染色质免疫沉淀法(ChIP)
4. RNA免疫沉淀法(RIP)
近年来,免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。
免疫沉淀IP技术选琼脂糖珠还是磁珠?蛋白免疫沉淀磁珠价格

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物学实验方法,用于从细胞或组织裂解物中分离和纯化特定蛋白质。这项技术依赖于抗体的高度特异性,通过抗体与目标蛋白质的结合,实现对目标蛋白质的富集和纯化。
具体操作步骤通常包括以下几个阶段:裂解细胞或组织,抗体与蛋白质结合,固相支持物的使用,免疫复合物的捕获,洗涤,洗脱分析。
免疫沉淀技术不仅可以用于检测蛋白质的存在和量,还可以用于研究蛋白质的翻译后修饰、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质稳定性以及蛋白质的功能等。此外,免疫沉淀技术是许多其他高级实验技术的基础,如染色质免疫沉淀测序(ChIP-Seq)和蛋白质相互作用网络分析等。
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免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验步骤通常包括以下几个关键环节:
1. 细胞裂解:首先需要收集细胞并裂解它们,以释放细胞内的蛋白质。这通常通过添加含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液来完成,以防止蛋白质降解。
2. 裂解物上清:裂解后的细胞混合物通常需要通过离心来去除未破碎的细胞碎片和未裂解的细胞,从而获得上清。
3. 抗体的添加:将特定于目标蛋白的抗体加入到裂解物中。这些抗体将特异性地结合到目标蛋白上。
4. 免疫复合物的形成:抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物。
5. 免疫复合物的捕获:使用Protein A/G结合的磁珠来捕获免疫复合物。
6. 洗涤:捕获免疫复合物后,需要用裂解/洗涤缓冲液多次洗涤,以去除未结合的蛋白质和其他污染物。
7. 洗脱:免疫复合物可以通过加入SDS样品缓冲液进行洗脱,这将导致抗体和抗原变性并从珠子上释放下来,或者使用低pH缓冲液进行温和洗脱,以保持蛋白质的天然构象。
8. 分析:洗脱后的样品可以通过SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法进行分析,以验证目标蛋白的存在和状态。

免疫沉淀ChIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀技术ChIP的原理是什么?

RIP技术的优势在于:
1. 特异性:利用特异性抗体,可以精确地捕获目标RNA结合蛋白及其相互作用的RNA。
2. 应用场景多:适用于研究RNA结合蛋白、miRNA、lncRNA等非编码RNA与蛋白质的相互作用。
3. 技术结合:RIP后的RNA可以用于多种下游分析,如qPCR、测序等,为研究RNA的功能和调控提供了重要信息。
RIP技术的限制包括:
1. 抗体质量:需要高质量的特异性抗体,否则可能得到假阳性或假阴性结果。
2. 非特异性结合:可能存在非特异性结合问题,需要仔细的实验设计和对照来控制。
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ChIP技术的应用:
1. 转录因子结合位点的鉴定:研究特定转录因子在基因组上的结合模式。
2. 组蛋白修饰的分布:分析不同组蛋白修饰在基因组上的分布情况,这些修饰与基因的活跃或沉默有关。
3. DNA甲基化研究:结合ChIP技术可以研究DNA甲基化对基因表达的影响。
4. 染色质结构和功能:研究染色质重塑对基因表达和细胞功能的影响。
5. 疾病相关基因的调控:研究疾病状态下基因调控网络的变化。
ChIP技术是表观遗传学研究中的一个重要工具,它可以帮助科学家们理解基因表达是如何在分子水平上被精确调控的。
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