企业商机
免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀实验步骤:
1. 样品制备
a. 悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液(裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×)。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
b. 贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞两遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内,按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液(裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×)。吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
4. 后续:磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱
免疫沉淀纯化所得抗原量低是什么原因?温州Co IP免疫沉淀磁珠原理

Co-IP的优势:
1. 生理相关性:Co-IP可以在接近生理条件的条件下捕获蛋白质相互作用。
2. 特异性:使用特异性抗体可以提高实验的特异性。
3. 广泛应用:Co-IP技术适用于多种样本类型,包括细胞培养、组织样本等。
Co-IP的局限性:
1. 抗体依赖性:需要高质量的特异性抗体,否则可能得到假阳性或假阴性结果。
2. 非特异性结合:可能存在非特异性结合问题,需要仔细的实验设计和对照来控制。
3. 技术挑战:对于低丰度或弱相互作用的蛋白质,Co-IP可能面临技术挑战。
上海RIP免疫沉淀外包公司免疫沉淀技术IP的实验设计。

ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种强大的技术,用于研究蛋白质与DNA之间的相互作用,尤其是在转录调控、DNA修复、复制以及表观遗传学领域。然而,像所有实验技术一样,ChIP实验也有其优点和缺点。
ChIP实验的优点:
1. 体内反应的反映:ChIP提供了一种在体内研究蛋白质与DNA相互作用的方法,能够真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白的调控信息。
2. 全基因组覆盖:ChIP技术可以覆盖整个基因组,提供关于蛋白质-DNA相互作用的视图。
3. 适用于多种蛋白质:ChIP可以用来研究组蛋白修饰、转录因子以及其他DNA结合蛋白。
ChIP实验的缺点:
1. 实验步骤繁琐。
2. 需要大量起始材料:ChIP实验通常需要大量的细胞或组织作为起始材料。
3. 交联的影响:使用交联剂可能会改变蛋白质的结构,从而影响抗体的识别和蛋白质-DNA的相互作用。
4. 染色质碎裂的分辨率:染色质碎裂的效率和分辨率直接影响ChIP的准确性,需要优化以获得结果。
5. 抗体质量:抗体的质量对实验结果至关重要,但高质量、特异性强的抗体可能难以获得或成本较高。

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验设计通常包括以下几个关键步骤:

1. 目标蛋白质的选择:
2. 抗体的选择:选择特异性强、亲和力高的抗体来捕获目标蛋白质
3. 样本的准备:收集和准备细胞或组织样本。
4. 蛋白质的裂解和释放:选择合适的裂解条件,如pH值、离子强度、去污剂等。
5. 蛋白质浓度的测定:确定裂解液中蛋白质的浓度,以便于后续步骤的标准化。
6. 免疫沉淀的操作:将特异性抗体与裂解液混合,并在适宜的条件下孵育,以形成抗体-抗原复合物。
7. 非特异性结合的减少:通过预纯化步骤去除可能的非特异性结合蛋白。
8. 洗涤:多次洗涤以去除未结合的蛋白质和杂质。
9. 目标蛋白质的洗脱:使用适当的缓冲液洗脱抗体-抗原复合物。
10. 后续分析:对洗脱的蛋白质进行进一步分析,如Western Blot.
11. 对照实验:设计适当的正对照和负对照,以评估实验的特异性和敏感性。
免疫沉淀纯化所得抗原纯度低是什么原因?

免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶联的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10min,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。免疫沉淀是一种生物学技术,它利用抗体的特异性结合特性来富集和分离混合物中的特定蛋白质。这种技术是研究蛋白质表达、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质修饰和蛋白质功能的强大工具。免疫沉淀ChIP技术选琼脂糖珠还是磁珠?温州Co IP免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀Co-IP技术选琼脂糖珠还是磁珠?温州Co IP免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀实验不同于WB实验的样品制备,对实验样品制备要求更高,除了要控制所有操作尽量在冰上完成外,关键的是裂解液的成分,裂解液成分直接决定了样品质量。
主要影响:
1. 蛋白的释放:许多目的蛋白定位在细胞器,质膜,细胞核,细胞骨架中,但通常这些亚细胞结构很难被裂解液有效溶解,所以很难将这些蛋白释放出来。
2. 蛋白相互作用:不同去垢剂对不同性质的蛋白质间相互作用影响程度不同,一些互作较弱的蛋白对尽管在比较温和的裂解液配方中仍然会被破坏。
温州Co IP免疫沉淀磁珠原理

世途科生物简介:

上海世途科生物科技有限公司是一家集研发、生产、销售于一体的,为全球用户提供生物试剂的生命科学企业。世途科生物(CYTOCH)汇集了一支由海内外KOL组成的研发团队,他们在生物和化学领域拥有相当丰富的研发经验,通过将化学与生物技术相结合,致力于现有技术难点突破、新技术研究,为相关科学研究者提供思路和解决办法。

凭借着强大的研发实力和严谨的质量管理,通过产学研合作,加快客户科研成果的转化,不断推动行业的发展。

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