本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术：近年来，随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用，成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中，血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是，由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物，例如血液中含有血红素，蛋白质，脂肪，抗凝剂等，唾液和口腔拭子含有蛋白质，脂肪，抗凝剂等，使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此，现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA，才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，模离心柱吸附法，磁珠法，等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞，将血红素物质释放出来，然后离心，清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞，释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质，去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 口腔拭子的采样头端的凹陷处折断力大小应该不小于2N。上海口腔拭子批发
本发明的特征在于：应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测，主要步骤如下。（1）将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀。（2）将步骤（1）中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，至沉淀完全散开，然后5000g离心30s，弃上清。（口腔拭子样本则无需进行此步骤）。（3）向步骤（2）所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1～2min；室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的基因组DNA；所述的核酸释放剂组成为20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺；所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2～图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。上海口腔拭子批发然后用同样的方法在右侧脸颊部/右侧上下牙床处粘膜处进行第二根拭子的取样。
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增，方法如下：将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀；然后再加入200μL核酸释放剂，涡旋1min至沉淀完全散开，5000g离心30s，弃上清；向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的血液基因组DNA；取上清液3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①：50℃，2min，循环1次。步骤②：95℃，5min，循环1次。步骤③：95℃15s，55℃30s（收集荧光），循环40次。结果分析：平行扩增的荧光定量PCR反应中，阴性对照无扩增，说明反应体系正常，无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本，然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测，结果如图1所示。
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用口腔拭子做亲子鉴定与抽血结果哪个好？对于亲子鉴定，委托人往往是慎重而严肃的，因为亲子鉴定结果的出炉，能够说明很多问题，并且还会带来一系列化学反应，比如丈夫可以通过亲子鉴定了解孩子是否自己亲生，从而确认自己是戴了“绿帽子”还是庸人自扰，而作为妻子，则可以通过亲子鉴定证明自己的清白，维护个人尊严和名声。用口腔拭子做亲子鉴定与抽血结果哪个好？华曦司法鉴定所的**告诉我们，DNA鉴定需要提供的检材类型是多样化的，常规检材有：口腔黏膜、血液、血斑、带有***的毛发。特殊检材包括**、精斑、牙刷、胎儿绒毛、胎儿羊水、流产物、组织、脐带血等。口腔拭子就是用单头的医用棉签也称为棉棒，通过擦拭口腔来采集口腔粘膜上皮细胞。与抽血采样相比，口腔拭子的特点是简便而且无创、无痛。用口腔拭子做亲子鉴定和抽血用血液做DNA鉴定是同样准确的，没有什么区别，两者的DNA鉴定结果是完全一致的，因为一个人的DNA无论来自于口腔细胞还是血液中的白细胞都是一样的，不会因为用的检材的不同而出现不同的鉴定结果。 这款口腔拭子采用国际通用的方便消灭细菌的纸塑包装。重庆样本口腔拭子源头厂家
这款口腔拭子主要用于提取采集人体口腔黏膜DNA用的，采集和释放都比较好。上海口腔拭子批发
口腔拭子DNA快速提取试剂盒产品简介口腔拭子DNA快速提取试剂盒专门为从口腔拭子刮取的黏膜组织和浸润的唾液中提取基因组DNA而设计，能有效回收＞50bp已降解的DNA，包括降解的基因组DNA，线粒体DNA和***DNA等。本试剂盒使用DNA吸附柱-C4回收DNA，**小洗脱体积为10μl。原理：BufferSL与蛋白酶K裂解细胞释放DNA，BufferGBR调整结合条件，***材料选择性吸附DNA，洗涤去除蛋白和盐，低盐溶液洗脱DNA。建议采样方式：使用吸水性强的棉质或无纺布材质的口腔拭子，含口中充分浸润唾液（唾液中DNA含量丰富）在脸颊内测刮10-20次。产品特点试剂盒包含的BufferSL可作为样品保护液（！如使用自备的保护液，请联系技术支持）；预期产量为2-5μgDNA/100μl唾液（与拭子材质和采样方式有关）；适合处理无纺布和棉质的拭子，不适合处理海绵材质的拭子。 上海口腔拭子批发
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