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免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀Co-IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀技术Co-IP的实验设计。RIP免疫沉淀实验原理

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免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物化学方法,它利用特异性抗体对抗原进行亲和纯化。在含有目的抗原的细胞裂解液中加入特定的抗体以及Protein A/G-Beads(预先将Protein A/G固定结合在磁珠上),根据抗原与抗体、Protein A/G与抗体的Fc的特异性,形成“抗原-抗体-Protein A/G-Beads”复合物,清洗离心后去除溶液中未结合的杂蛋白,检测是否存在目的蛋白。
免疫沉淀技术常用于从细胞或组织裂解物中分离用于免疫印迹检测或其他检测技术的蛋白和其他生物分子。它的目标是分离足够用于Western Blot或其他检测方法检测的蛋白质。
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Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其应用场景如下:
1. 蛋白质相互作用网络的鉴定:Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络,发现目标蛋白的结合伙伴。
2. 信号传导途径的研究:通过Co-IP技术,科学家们发现了许多关键的细胞信号通路,如MAPK和PI3K/Akt通路等,为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。
3. 药物靶点筛选:利用Co-IP技术,研究人员可以筛选潜在的药物靶点。
疾病机制研究:通过分析疾病相关蛋白质的相互作用,Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。
4. 抗体药物开发:Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性,评估抗体药物的亲和力和特异性。
5. 转录因子研究:Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用,进而揭示基因调控网络。

ChIP(染色质免疫沉淀)实验是一种强大的技术,用于研究蛋白质与DNA之间的相互作用,尤其是在转录调控、DNA修复、复制以及表观遗传学领域。然而,像所有实验技术一样,ChIP实验也有其优点和缺点。
ChIP实验的优点:
1. 体内反应的反映:ChIP提供了一种在体内研究蛋白质与DNA相互作用的方法,能够真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白的调控信息。
2. 全基因组覆盖:ChIP技术可以覆盖整个基因组,提供关于蛋白质-DNA相互作用的视图。
3. 适用于多种蛋白质:ChIP可以用来研究组蛋白修饰、转录因子以及其他DNA结合蛋白。
ChIP实验的缺点:
1. 实验步骤繁琐。
2. 需要大量起始材料:ChIP实验通常需要大量的细胞或组织作为起始材料。
3. 交联的影响:使用交联剂可能会改变蛋白质的结构,从而影响抗体的识别和蛋白质-DNA的相互作用。
4. 染色质碎裂的分辨率:染色质碎裂的效率和分辨率直接影响ChIP的准确性,需要优化以获得结果。
5. 抗体质量:抗体的质量对实验结果至关重要,但高质量、特异性强的抗体可能难以获得或成本较高。
免疫沉淀技术的应用。

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免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验步骤通常包括以下几个关键环节:
1. 细胞裂解:首先需要收集细胞并裂解它们,以释放细胞内的蛋白质。这通常通过添加含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液来完成,以防止蛋白质降解。
2. 裂解物上清:裂解后的细胞混合物通常需要通过离心来去除未破碎的细胞碎片和未裂解的细胞,从而获得上清。
3. 抗体的添加:将特定于目标蛋白的抗体加入到裂解物中。这些抗体将特异性地结合到目标蛋白上。
4. 免疫复合物的形成:抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物。
5. 免疫复合物的捕获:使用Protein A/G结合的磁珠来捕获免疫复合物。
6. 洗涤:捕获免疫复合物后,需要用裂解/洗涤缓冲液多次洗涤,以去除未结合的蛋白质和其他污染物。
7. 洗脱:免疫复合物可以通过加入SDS样品缓冲液进行洗脱,这将导致抗体和抗原变性并从珠子上释放下来,或者使用低pH缓冲液进行温和洗脱,以保持蛋白质的天然构象。
8. 分析:洗脱后的样品可以通过SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法进行分析,以验证目标蛋白的存在和状态。
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免疫沉淀技术Co-IP实验步骤。RIP免疫沉淀实验原理

免疫沉淀实验步骤:
1. 样品制备
a. 悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液(裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×)。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
b. 贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞两遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内,按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液(裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×)。吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
4. 后续:磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱
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