与IdeS不同,在蛋白质zhiliao药物的质量控制过程中,详细分析和识别质量属性非常重要。对于具有柔性连接子的融合蛋白疗法,这包括确认连接蛋白的质量以及蛋白质接头的质量。使用 Genovis的GlySERIAS 的连接子酶切可以通过分离连接的蛋白质结构域来帮助这种质量控制。然而,连接子中的大量甘氨酸残基提供了酶的许多潜在消化位点,导致连接子内多个位点同时水解。消化的产物通常由连接蛋白的几种变体组成,并保留不同程度的连接子。虽然观察到的异质性通常不会对蛋白质亚基的详细表征产生负面影响,但有助于直接表征连接子,但有时需要更均匀的消化产物来详细分析单个蛋白质结构域。通过将酶偶联到树脂上,可以增加酶与蛋白质的比率,从而可以进一步加速反应,以获得更完整的蛋白质的消化。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶

与IdeS不同,Genovis的IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性蛋白酶,可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM,产生均质的F(ab')2和Fc片段。该酶能够对复杂和高分子量的人IgM进行中级分析,从而促进疫苗、zhiliao和诊断等过程中的IgM表征。独特-可实现IgM的中级表征和质量控制;快速–在30分钟内生成均匀的F(ab')2和Fc片段;高度特异性–人IgM重链中的一个消化位点。IgMBRAZOR是一种独特的IgM特异性酶,可在重链中CH2结构域下方的一个特定位点消化人IgM,产生F(ab')2和Fc片段。消化在30分钟内完成,并且由于酶的特异性,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。该酶在pH值为5.5至9.0时具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。良好的活性是在37°C下,但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgMBRAZOR在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为38kDa。吉林FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白组学该酶在pH 值范围为 5.0 至 9.0 时显示出活性。

与肽图谱相比,根据Genovis科学家的经验,尤其是对于像抗体这样的分子,许多人在常规实验中做了太多的肽图谱,而中级水平(Middle-level)的方法可以很好地工作。中级方法(IdeS酶切抗体)需要更少的实际操作步骤和较少的示例处理,所有这些都意味着过程中出错的事情更少。我们的许多酶可以作为平台方法,同样的方法适用于绝大多数的抗体,这不是肽图的情况下,可能需要优化整个样品制备,LC分离,质谱设置和数据分析的每个不同的抗体分析。这些变化可能是很小的,但没有一种适用于所有肽图的方法。由于分析和数据分析的简单性,中级方法非常适合自动化和高通量的工作流程。肽图当然可以自动用于样品制备,但高通量肽图生成大量数据,仍然需要彻底分析。事实上,肽图谱是一个多步骤的过程,每一个步骤都可能破坏方法,并可能导致破坏蛋白质的人工制品,很难交叉训练给非专业人员。中级水平的方法很容易交叉训练,我们的方法在质量控制实验室中被成功地使用。肽图谱是一种用于修饰分析和氨基酸确认的方法,但一旦完成了这一工作,我相信使用中级分析可以成功地更有效地完成抗体样本的大部分工作。
为了让所有实验室都能同时快速自动消化多种抗体,Genovis的FabRICATORMagIC的设计具有灵活性,适用于一系列自动化平台。我们在ThermoScientific™KingFisher™纯化系统上优化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以转移到其他自动化平台,如果没有自动化,在振动台上也能同样出色地工作。消解后,将含有处理样品的深孔板直接转移到LC-MS的自动进样器中进行快速色谱分析,或转移到其他分析方法进行分析。FabRICATORMagIC与在消解缓冲液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以极大限度地减少自动化系统中可能发生的纯粹压力。使用KingFisher仪器处理样品时,样品制备非常简单。将样品、树脂和缓冲液移液到指定的孔或板中,然后将板放入仪器中。设计用于FabRICATORMagIC的BindIt™协议将控制每个步骤的孵育温度和时间。FabRICATOR MagIC磁珠含有Ides固定化酶专为自动化平台(振动台)而设计。

用于IgA1和IgA2m1以上铰链消化的冻干酶。与IdeS不同,Genovis提供的IgASAPSub1+2在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1和IgA2m1,产生完整且均匀的Fab和Fc片段。由于人IgA1的铰链比IgA2的铰链长,因此IgA1和IgA2m1之间来自消化位点的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育时间为过夜(16-18小时),并且由于酶的特异性,没有过度消化的风险。该酶在pH值为6.0至8.0时具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可产生活性。活性为37°C。IgASAPSub1+2是从丹毒梭菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为131kDa。IgASAPSub1+2冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1和IgA2m1。也不需要任何额外的辅助因子,它将在不同生理缓冲中发挥作用。吉林GingisREXIdeS蛋白酶抗体酶切
这包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc纯化柱,用于亚基的亲和纯化。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶
当你应用像肽图这样的方法时,你可以从Genovis中级方法中获得的信息量就没有那么多了。一个主要的区别是你不能像在肽水平上那样将修改定位到单个氨基酸。然而,中级分析比肽图谱具有快速和简单的巨大优势,因为需要分析的色谱峰要少得多,数据处理任务要简单得多。此外,在中级实验中,手工实验步骤要少得多,FabALACTICA(IdeS)酶切消化方法不需要针对不同的人体IgG1进行优化。一旦在氨基酸水平上进行了PTM表征,我们非常认为中级表征肽图的一种补充方法,可以在更常规的基础上应用。中级分析更适用于高通量或监测类型的方法,并可用于支持肽图分析。陕西FabALACTICAIdeS蛋白酶
当你应用像肽图这样的方法时,你可以从Genovis中级方法中获得的信息量就没有那么多了。一个主要的区...
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