从膜的质地上来看,较重要的指标就是单位面积上能够结合的蛋白的量。硝酸纤维素膜(NC膜)的结合能力主要与膜的硝酸纤维素的纯度有关,市场上有些硝酸纤维素膜(NC膜)通常会还有大量的醋酸纤维素,因而降低了蛋白的结合量。如果采用的是100%纯度的硝酸纤维素, 保证了较大的蛋白结合量,可达80-150μg/cm2。由于100%的纯度,因而也有效减少了非特异性的结合,降低杂交背景,无需高严谨度的洗脱步骤。其次,膜的强度和韧性也是需要考虑的因素。常规的硝酸纤维素膜比较脆,漂洗一两次就会破损,不能反复使用。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。膜材料易于加工和安装。重庆带电尼龙膜在哪买
不同秒数的膜对反应有什么影响呢?首先,我们分析一下液体在膜上的运动过程。一张长度为4cm的膜, 每隔1cm做一个标记, 当液体运动过标记处时记录时间点. 那么你将会发现液体在膜上的运动是呈减速前行的。而两张不同秒数的膜(例如135s, 180s)在同一时间标记点处的运动速度不同.这个试验用清水做不好观察,可以考虑用色素水溶液,非常明显。那么从这个试验可以看出,在通过同一T线喷点位置时,金溶液通过的速度是快速膜大于慢速膜。那么通过速度越快和包被在T线的物质反应时间也就越短,读数快,那么灵敏度也就越低。反之,反应时间长,读数慢,也就灵敏度高。同时还有一个问题是,反应时间越长,发生非特异性结合的可能性就越大,所以过长时间的反应不一定就能够真正的提升灵敏度。所以这里就有一个读数时间/反应灵敏度/非特异性结合的均衡。青岛机打转印膜定做PVDF转印膜为高标清晰国际标准色。
安装转印槽子:将滤纸和海绵放入电印迹缓冲液中浸泡一下,依次按照海绵、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、海绵的次序将电印迹夹层装好,并放入小型电转槽中;电印迹转移:于转印条件下(50V,100-170mA)室温进行电印迹转移,转移时间一般为5-2小时(根据蛋白质具体分子量大小而定);PVDF膜染色前处理:取出PVDF膜并用去离子水漂洗,用甲醇浸泡数秒钟,然后进行染色;膜染色:染色剂30-50秒(切勿超过1分钟),50%甲醇脱色(勤换脱色液),之后用去离子水充分洗涤后晾干即可。转印膜是一种经济型选择,用于核酸和蛋白质印迹实验方案。这种硝化纤维素转印膜,是Southern、colony/plaque以及蛋白质实验方案中较初使用的膜。NC HATF所含的混合纤维素酯基质,不含在细胞生长过程中会干扰细胞壁完整性的表面活性剂。这些膜用于colony lifts。NC HAHY所含的混合纤维素酯基质,所带的表面活性剂能够增强可湿性以及转印过程中的处理能力。两种膜对核酸和蛋白质都具有高吸附容量。适用于常规转印。
从本节开始,我们开始对膜进行深入讨论和谈一些应用技巧。1. 蛋白与膜的结合原理。蛋白与膜的结合原理, 已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑.主要有两种假说:1 首先两者靠静电作用力结合, 然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合.2首先两者靠疏水作用结合, 然后靠静电作用来维持长时间结合。两条假说, 都表明其结合过程分为两步, 首先结合和后面长时间结合.由于结合原理的不明确性, 导致在这方面的工作非常依赖实践经验.2. 膜对结合的影响。 有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜,但是请注意这只只只限于同一厂家的产品,如果是不同厂家的产品,这种比较是无意义的. 膜孔径与层析速度的关系,已在上文描述。PVDF转印膜材料能够满足各类图案的复杂细节。
随着膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增. 估量表面积的参数为表面积比率(实际可用表面积与所用膜平面积的比率).另外, 膜孔径越小,层析速度也越小,那么金标复合物通过T线的时间也就越长,反应也就越充分.综合以上两点,结论为膜孔径越小灵敏度越高.但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高.所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜,找到合适的平衡点。首先,单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体, 主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位点, 而各位点与膜的较佳结合条件都有细微的差别, 毫无疑问就增加了优化难度。其次,分子量越大,蛋白越难结合到固相材料上。膜材料颜色浅且表面平整,能够满足不同行业的需求。重庆带电尼龙膜在哪买
膜材料能够提高产品外观的美观性。重庆带电尼龙膜在哪买
转印膜用于蛋白质和核酸的转移和检测过程,主要分为:正电荷尼龙膜/硝酸纤维素膜/PVDF膜(Positively charged nylon/Nitrocellulose/PVDF membrane)。已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑.主要有两种假说:1 首先两者靠静电作用力结合, 然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合.2首先两者靠疏水作用结合, 然后靠静电作用来维持长时间结合.两条假说, 都表明其结合过程分为两步, 首先结合和后面长时间结合.由于结合原理的不明确性, 导致在这方面的工作非常依赖实践经验。重庆带电尼龙膜在哪买