培养基的配制:分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角瓶:若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15~20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。试管分装:液体培养基一般装4~5ml,约试管的1/4高度;固体斜面培养基一般装3~4ml,约试管的1/5高度。包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。摆斜面:灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。贮存:培养基在30℃下放置,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。培养基制备器通过分装口可以定量添加无菌添加剂。中国台湾Systec培养基制备器

培养基中血清的质量标准:血清质量高低取决于两方面因素:一是取材对象,二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内,取材过程应严格按照操作规程执行,制备出的血清要经过严格的质量鉴定。《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求:牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家要求无细菌噬菌体污染。对细胞有良好的支持繁殖作用。中国台湾Systec培养基制备器培养基制备器具有液量分配,时间分配,复制分配三种工作模式。

马铃薯培养基的制作过程:(1)称量和熬煮:按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。(2)加热溶解:把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。(3)分装:按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。(4)加棉塞:培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
培养基的使用:1.琼脂培养基的融化:将培养基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高压锅中的蒸汽)融化。经过高压灭菌的培养基尽量减少重新加热的时间,避免过度加热。培养基融化后立即移开,室温静置片刻(约2min),以免玻璃容器发生破裂。融化后的培养基放入47℃~50℃恒温水浴锅中保温,冷却到47℃~50℃所需的时间取决于培养基的类型、体积和在水锅里的分装量。融化后内培养基应尽快使用,放置时间一般不超过4h。剩余的培养基固后不得再次融化使用。特别是灵敏性培养基,应根据相关标准,缩短融化后放置的时间。培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,较好一次完成,不要中断。

微生物培养基制备:溶解灭菌后,盘子上无不溶性结晶紫、无紫色斑;与未溶解和消毒的盘子相比,盘子上有结晶紫和紫色斑点。因此正确的步骤顺序是在高压灭菌前需要进行培养基煮沸溶解。先煮沸溶解后冷却至二十五度,确定pH值;对需要高压灭菌的介质取平均值,高压灭菌后冷却至二十五度,这两种状况测量培养基pH值,固体培养基至少检测两个点,取它们的平均值。控制培养基在容器中不要超过百分之八十,避免填充过多。注意控制高压灭菌时间过长(115-116度)二十分钟即可,温度不超过121度,而且灭菌后的培养基在高温环境中不要长时间存放。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应折叠成折扇或漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。广西培养基制备器厂家
紫外线作用于核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧,从而起共同杀菌作用。中国台湾Systec培养基制备器
培养基的质量测试:每批培养基制备好以后,应仔细检查一遍,如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其较终pH.将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜,如发现有菌生长,即弃去。用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基,培养24~48小时,如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次,如结果仍同前,则该批培养基即应弃去,不能使用。培养基的保存:培养基应存放于冷暗处,较好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周,倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。中国台湾Systec培养基制备器
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