1.细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份,参与细胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液,前者缓冲能力较弱,适合于密闭培养;后者缓冲能力较强,适合于5%CO2的培养条件。天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、鸡胚浸出液等。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,但缺点是成分复杂,来源受限且制作过程复杂、批间差异大。目前使用的天然培养基是血清,另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物。MCDB是为特定细胞设计的低蛋白和无血清培养的培养基。辽宁DMEM细胞培养基源头厂家
成分说明:货号L-谷氨酰胺L-丙氨酰-L-谷氨酰葡萄糖HEPES酚红双抗HCY-BCM07001★★★HCY-BCM07001A★★★★HCY-BCM07002★★★★HCY-BCM07002A★★★★★HCY-BCM07003★★★HCY-BCM07004★★HCY-BCM07005★★★HCY-BCM07006★★★★HCY-BCM07007★★HCY-BCM07008★★★HCY-BCM07009★★HCY-BCM07010★HCY-BCM07011★★HCY-BCM07012★★★HCY-BCM07013★★HCY-BCM07014★HCY-BCM07015★★HCY-BCM07016★★★HCY-BCM07017★HCY-BCM07018★★HCY-BCM07019★HCY-BCM07020HCY-BCM07021★★HCY-BCM07022★HCY-BCM07023ATCC改良HCY-BCM07024Dutch改良HCY-BCM07025不含叶酸HCY-BCM07026不含蛋氨酸不含葡萄糖不含酚红HCY-BCM07027SILACRPMI-1640FlexHCY-BCM07028SILACRPMI-1640RPMI-1640细胞培养基L-谷氨酰胺(Glutamine)是细胞培养中所必需的一种营养元素,但其在溶液中不稳定,会自发降解,不含L-谷氨酰胺的培养基,可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量,在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Glu),又名丙氨酰谷氨酰胺、丙谷二肽,是一种高级细胞培养添加剂,可直接替代细胞培养基中的L-谷氨酰胺。上海样本细胞培养基生产产家M199全称Medium 199,广泛应用于各种动物细胞的培养,包括一些非哺乳类动物细胞。
Ham’sF-12K培养基是Ham’sF-12营养混合物的Kaighn’s改进型,在Ham’sF-12的基础上提高了氨基酸和**酸的浓度,降低了葡萄糖的用量,并修改了盐的成分和含量(Konigsbergs)。Ham’sF-12K培养基**初设计用于培养原代人肝细胞以及分化的大鼠和鸡的细胞。针对较广的细胞培养应用,我们提供多种组分的Ham’sF-12K改良培养基。L-谷氨酰胺(Glutamine)是细胞培养中所必需的一种营养元素,但其在溶液中不稳定,会自发降解,不含L-谷氨酰胺的培养基,可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量,在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。NEAA(非必须氨基酸),是在MEM培养基的基础上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(门)冬酰胺、L-天(门)冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种NEAA,能降低细胞培养时细胞自身生产非必须氨基酸的副作用,有效促进细胞增殖代谢。
无血清培养基中通常需要添加一些额外的组分,才能帮助细胞贴壁生长,包括以下几大类物质:1)促贴壁物质:一般为细胞外基质,如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。2)促生长因子:针对不同细胞添加不同的生长因子。也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质,有些是许多细胞必不可少的,如胰岛素。3)酶抑制剂:培养贴壁生长的细胞,需要用胰酶消化传代,在无血清培养基中需含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到保护细胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制剂。4)结合蛋白和转运蛋白:常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比较大,可增加培养基的粘度,保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。5)微量元素:硒是常见的。Eagle培养基由Harry Eagle在Eagle基本培养基(BEM)的基础上发展而来的。
L-谷氨酰胺(Glutamine)是细胞培养中所必要的一种营养,但其在溶液中不安定,会自发降解生成氨和焦谷氨酸,其中氨对细胞危害;而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中格外的安定,不会自发的降解。细胞运用其机制是:在细胞培训时,细胞会日益向培养液中获释一种肽酶,将L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺,而后细胞会将这两种水解产物吸收运用。细胞运用L-丙氨酰-L-谷氨酰的过程与流加培养方针相像,连续的将低浓度水准的L-谷氨酰胺加入到培养液中,从而提高了L-谷氨酰胺的利用率,且不会生成剩余的氨,更有利于细胞的生长。L-丙氨酰-L-谷氨酰可以取而代之等摩尔的L-谷氨酰胺,适用于所有的细胞,几乎无须适应,并且可以延长细胞的培养时间,缩减传代次数,即节约了时间也节省了钱财。与添加L-谷氨酰胺的培养基中培训的细胞相比之下,活性减低得更慢。延滞期稍为延长的缘故是肽酶的释放和二肽的消化需一定的时间。NEAA(非须要氨基酸),是在MEM培养基的基本上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(门)冬酰胺、L-天(门)冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种NEAA,能下降细胞培育时细胞自身生产非须要氨基酸的副作用,有效性推动细胞增殖代谢。葡萄糖可以根据研究需。MEMα是一种改良的MEM培养基,在MEM的基础上又添加了NEAA、硫酸锌、VB12、生物素、抗坏血酸等成分。甘肃昆虫细胞培养基检测
Ham’s F-10适合用于人二倍体细胞的培养,低血清条件下细胞的克隆化培养,及动物的原代细胞培养。辽宁DMEM细胞培养基源头厂家
含丰富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡盐溶液溶解)与合成培养基(如MEM细胞培养基)以1:1的比例混合使用。目前用于细胞培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。此外,血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。目前,血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用,使用浓度一般为5~20%,常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份复杂,批间差异大及存在病毒等外源污染风险,对下游生物制品的分离纯化和安全性都存在较大的影响,在生物制药行业的使用也越来越少。因此,基于对血浆成份的分析,合成细胞培养基应运而生。合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。开发的基础培养基(minimalessentialmedium,MEM)。辽宁DMEM细胞培养基源头厂家
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