唾液外泌体质谱

目前为止已鉴别了2500余种miRNAs分子。例如，血液外泌体miR-21的升高已被证实与胰腺ai、结直肠ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai及食管ai等多种中流相关，可能与其参与中流xue管生成有关，研究表明肺ai细胞释放的外泌体miR-21会通过STAT3依赖机制诱导周围支气管细胞血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）的产生，从而促进血管生成。在食管ai中，miR-21还可以反映中流的恶性程度，食管ai患者的miR-21水平与良性中流患者相比急剧上升，上升的miR-21水平也与中流的淋巴侵袭和转移相关。在膀胱ai患者中，尿液中的miR-21和miR-4454会明显上调。外泌体的大小：外泌体的直径约30-150nm。唾液外泌体质谱

外泌体的生物发生和鉴定。液体和细胞外成分，如蛋白质、脂类、代谢物、小分子和离子，可以通过内吞作用和质膜内陷，与细胞表面蛋白一起进入细胞。由此产生的胞腔侧质膜芽的形成表现为质膜的外-内取向。这一出芽过程导致芽的形成可能与内质网(ER)、跨高尔基网络(TGN)和线粒体预先形成的早期核内体融合。ESEs也可以与ER和TGN融合，这可能解释了内吞物如何到达它们的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。唾液外泌体质谱外泌体可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化等方方面面。

Vlassov等人发表的一篇外泌体的提取方法及组成的专利文献中介绍，通过终浓度为8%的PEG6000与生物体液共孵育14h后，10000xg离心1h，可将直径在30-150nm之间，且包含丰富RNA的外泌体沉淀下来。因此采用终浓度为8%的PEG6000沉淀血清中的外泌体，为了进一步纯化胎盘相关外泌体，将获得的包含外泌体的沉淀用PBS重新悬浮后，加入非线性蔗糖密度梯度层，10000xg超速离心5h，将分层液采用PEG6000进行2次沉淀。经过多次实验反复验证，确定同时表达外泌体标志蛋白分子及胎盘特异性蛋白分子的胎盘来源外泌体所在密度层。

外泌体的提取、纯化和鉴定：每一个外泌体研究者较初都要为外泌体的分离提取而烦恼。选择的分离方式是利用超速离心的方式分离外泌体，并且可以选用梯度密度离心法得到纯度更高的外泌体。另外利用外泌体自身的物理化学性质所研发的各种市售的外泌体分离提取试剂盒也能达到分离效果。提取的外泌体的鉴定方式主要是通过形态学（电子显微镜技术）、粒子大小以及标志蛋白等方式实现的。近来的研究发现外泌体在比较多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、瘤子的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能比较好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此是一种比较好靶向给药系统。外泌体就像是生物界的邮差，可以在细胞间运输和转移生物活性分子，是细胞间通讯交流的载体。

外泌体及其携带的组分参与肝脏细胞的增殖、再生和迁移等生理过程，在肝脏疾病和肝损伤中起着重要作用，如肝病、肝硬化、肝纤维化、酒精性脂肪肝等。抑制或阻止外泌体的分泌，或许是治理肝脏疾病的一种新型策略。此外，外泌体具有稳定性和生物安全性，也可以用作载体携带改造的基因或药物，或用作疫苗诱导免疫反应杀死瘤细胞。外泌体会起到一定的保护作用，抵抗病毒的作用。与HCV类似，HBV患者的血清中分离到的外泌体同样携带HBV核酸分子和蛋白质。HBV阳性的外泌体会主动转移HBV到肝细胞中。外泌体中HBV核酸分子还会抑制RIG-1和下游信号通路，导致NK细胞功能紊乱。干细胞外泌体可以有效活化提高细胞能量加速细胞排毒、淡化色斑。研究所外泌体提取试剂盒报价

NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。唾液外泌体质谱

外泌体的相关成分：1、外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋。唾液外泌体质谱

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