细胞培养过程中,细胞培养基是不可或缺的,细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。通常细胞体外培养时需要加入血清,以维持细胞的生长和存活。而除了血清之外,部分细胞在培养过程中需要添加胰岛素和β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分来维持细胞状态。MCF-7和NIH:OVCAR-3等细胞需要额外添加胰岛素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等细胞则需要添加β-巯基乙醇,不同细胞加入量会有差异,需根据细胞类型判断。制备培养基需要考虑生长细胞所需的营养、酸碱度和水分含量等因素。硫乙醇酸盐培养基(Brewer)
要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中,长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖,因此含糖培养基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟进行灭菌,某些对糖类要求较高的培养基,可先将糖进行过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合。亚碲酸钾溶液常见的培养基包括LB培养基、TSB培养基等。
L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是细胞生长的必须氨基酸,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中状态不稳定,它的降解速率随保存时间,保存温度及保存环境pH值等变化而变化。L-丙胺酰-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine)是细胞培养中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品,其在水溶液中稳定性高,即可保持长时间稳定的营养供给,也降低了分解产物造成的细胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液(L-alanyl-L-glutamineslution)可作为哺乳动物贴壁细胞或悬浮细胞培养添加剂。与谷氨酰胺相比,L-丙胺酰-谷氨酰胺不会自行降解成氨而导致细胞毒性,作为添加物培养条件更加可控,可有效提高细胞活力。
培养基按成分分类有哪些?上海瑞楚生物科技有限公司小编介绍,根据培养基的组成成分,可分为天然培养基和合成培养基两大类。天然培养基(native medium) 含有不完全明了化学成分的天然物质。如蛋白胨、牛肉膏(粉)、肉浸液、玉米浆、血液、马铃薯等。用此类材料配成的培养基很难做到不同批号之间质量的稳定一致,因此在选用原料时务必注明其商品名称、生产厂家及批号,对不同来源的原料应先做小样试验。此种培养基成本较低,细菌繁殖较好,一般细菌培养以选用天然培养基为主。液体培养基、固体培养基和半固态培养基是常用的培养基种类。
在培养基中加人某种抑制剂和指示剂,抑制某些细菌生长,促进目的菌的繁殖,并使所生长的细菌菌落具有一定特征,以助鉴别挑选,这类培养基称为选择性鉴别培养基。如SS琼脂,在该培养基配方中含有乳糖(反应底物)、中性红和柠檬酸铁铵(指示剂)、灿烂绿及胆盐等(抑菌剂)。灿烂绿和胆盐等抑菌剂能抑制革兰氏阳性菌及部分大肠埃希菌的生长,而对沙门菌及志贺菌基本无影响,而且大肠埃希菌能发酵乳糖产酸,使菌落变红色,沙门菌和志贺菌不发酵乳糖,其菌落为无色。如细菌产生硫化氢,则与柠檬酸铁铵反应生成硫化亚铁沉淀,菌落中心呈黑色或褐色。以此达到鉴别的目的。LB培养基是普遍使用的通用培养基,适用于大多数肠道菌和非肠道菌的培养。亚碲酸钾溶液
培养基是一种供养分离的微生物和生物样品的营养物质基质。硫乙醇酸盐培养基(Brewer)
HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡,以维持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空气水平的CO2中,溶液会变碱,Hanks′液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagle′s液,如果只是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks′液就可以了。由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时,需要注意一点:新配的培养基在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时,溶液的pH 还会向上浮动0.2左右。硫乙醇酸盐培养基(Brewer)
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