Chapman Stone琼脂培养基

在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。例如，在微生物单细胞蛋白的工业生产过程中，常常利用糖蜜（制糖工业中含有蔗糖的废液）、乳清（乳制品工业中含有乳糖的废液）、豆制品工业废液及黑废液（造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆）等都可作为培养基的原料。再如，工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料，而在我国农村，已推广利用人畜粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。另外，大量的农副产品或制品，如鼓皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。制备培养基需要考虑生长细胞所需的营养、酸碱度和水分含量等因素。Chapman Stone琼脂培养基

要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言，更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基用1.05kg/cm2，121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中，长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏，如使糖类物质形成氨基糖、焦糖，因此含糖培养基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分钟进行灭菌，某些对糖类要求较高的培养基，可先将糖进行过滤除菌或间歇灭菌，再与其他已灭菌的成分混合。毛藓菌琼脂4号培养基是细胞和微生物生长所需的基本营养物质和环境条件。

氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分，氨基酸中有12种是细胞本身不合成的，必须由培养液提供。水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄色粉末状，富含氨基酸。一般配制成0．5%溶液，微酸性。胶原是从动物真皮中提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。特殊培养基：包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势，如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型，由于胞内渗透压较高，故培养基必须采用高渗低琼脂培养基。

培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。配好后不宜久置，现配现用。如果细菌的生长受到限制，可以尝试调整培养基的成分或添加辅助物质，例如控制培养基中氧气的含量。

HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks′液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液，如果只是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：新配的培养基在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时，溶液的pH 还会向上浮动0.2左右。致病菌常用的培养基包括营养琼脂平板培养基、马铃薯葡萄糖琼培养基。胰膘琼脂

常用的培养基中添加的基本营养物质包括碳源、氮源、磷酸盐、有机物、无机盐和微量元素。Chapman Stone琼脂培养基

在培养基中加入 HEPES 有何好处?培养基中常用的缓冲体系是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理 pH 条件下会降低缓冲能力。而HEPES 是一种很强的缓冲剂，能使细胞培养基在 pH7.2-7.6 条件下缓冲能力增强。HEPES溶液：是一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境，CO2 气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。神经细胞原代培养的过程中能用到。Chapman Stone琼脂培养基

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