湿热灭菌：湿热灭菌在高压锅或培养基制备器中进行，高压灭菌一般采用121℃±3℃灭菌15min，具体培养基按食品微生物学检验标准中的规定进行灭菌。培养基体积不应超过1000mL，否则灭菌时可能会造成过度加热。所有的操作应按照标准或使用说明的规定进行。灭菌效果的控制是关键问题。加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。这对于大容量和敏感培养基十分重要，例如含有煌绿的培养基。过滤除菌：过滤除菌可在真空或加压的条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜。消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备。一些滤膜上附着有蛋白质或其他物质（如物品），为了达到有效过滤，应事先将滤膜用无菌水润湿。培养基根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基。海南琼脂培养基制备器
培养基的脱气：必要时，在使用前将养基放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min,加热时松开容器盖子；加热后盖紧盖子，并迅速冷却至使用温度。3.添加成分的加入：对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃~50℃时加入,灭菌的添加成分加入前应冷却至室温,避免冷的液体会造成琼脂凝胶或形成片状物。4.培养基的弃置：所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式,并符合相关法律法规的规定。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基较终pH之用。西藏培养基制备器报价调节氧化还原电位(Eh) 各种微生物对培养基的Eh要求不同。
培养基的制备：正确制备培养基时微生物检验的较基础步骤之一。使用脱水培养基和其他成分，尤其是含有有毒物质(如胆盐或其他选择剂)的成分时,应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配置。记录所有相关数据，如质量/体积、pH、制备日期、灭菌条件和制备人员等。使用各别成分制备培养基时,应按照配方准确配制,记录所有细节信息,如;培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积(分装体积)、无菌措施(包括实施的方式、温度及时间)、配置日期、人员等,以便潮源。
高压灭菌造成培养基结焦焦化问题：在实验过程中，检测人员发现在高压灭菌后的培养基有结焦焦化现象。微生物认为造成这种现象是：控制培养基在容器中不要超过百分之八十，避免填充过多。注意控制高压灭菌时间过长（115-116度）二十分钟即可，温度不超过121度，而且灭菌后的培养基在高温环境中不要长时间存放。以上原因都会导致培养基结焦焦化。贮存：培养基在30℃下放置1天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。培养基制备器必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。
培养基的物理灭菌方法：（一）加热灭菌法：加热可破坏微生物中酶、蛋白质和核酸，导致微生物死亡。加热灭菌又分干热灭菌法和湿热灭菌法。在同一温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好。主要是因湿热灭菌时，有水分存在，蛋白质容易变性。水分又易使微生物膜壁润湿，湿热的穿透力比干热大。常用的有火焰灭菌法与干热空气灭菌法两种。（二）紫外线灭菌法：是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。一般用于灭菌的紫外线波长是200~300nm，灭菌力较强的波长是253.7nm。紫外线作用于核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。紫外线进行直线传播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但较易穿透清洁空气及纯净的水。培养基制备器完全灭菌后用于单种微生物培养和鉴定，一般都是在无菌状态下储存，定量使用的。四川Systec培养基制备器
平板培养基要除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。海南琼脂培养基制备器
培养基的配制：分装：一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角瓶：若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15～20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。试管分装：液体培养基一般装4～5ml，约试管的1/4高度；固体斜面培养基一般装3～4ml，约试管的1/5高度。包扎：分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌：按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。摆斜面：灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。贮存：培养基在30℃下放置，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。海南琼脂培养基制备器
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