外泌体与巨噬细胞

外泌体的临床应用：间充质干细胞是目前较普遍使用的细胞类型，它具有自我更新，多向分化、分泌细胞因子和细胞外囊泡体、免疫调节、来源普遍等特点，在流感病毒的临床诊疗中取得了良好的成果。间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，包括修复与再生组织、阻止炎症反应及调节机体免疫，但外泌体相对于间充质干细胞又有许多优势。首先，间充质干细胞来源外泌体更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量。其次，它们没有活细胞，不会像间充质干细胞那样可能会过多增殖而放大疗效或者病变导致疾病加重；另外，它有可能避免某些针对间充质干细胞的调控问题，间充质干细胞来源外泌体有代替间充质干细胞的趋势。度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高。外泌体与巨噬细胞

获得囊泡粒径分布的两种方法动态光散射(DLS)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)都被广fan应用于外泌体颗粒数目和粒径分布的测量，但两种方法也各有不足。动态光散射法中散射光强度依赖于颗粒质量(体积)，混合体系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)将严重影响测量结果，因此动态光散射法更适用于单分散体系。而且动态光散射法所得的结果强烈依赖于所应用的数学算法。而采用纳米颗粒跟踪分析仪对不同粒径范围的囊泡进行检测时，为了得到准确的浓度和粒径信息，需要根据所要测量的颗粒粒径范围对仪器分别校准，操作繁琐。受检测灵敏度所限，纳米颗粒跟踪分析仪适用于粒径范围50nm～1μm的颗粒，粒径小于50nm的外泌体无法检测。除此之外，两种方法都依赖光散射和粒子的布朗运动进行分析，难以区分合成的纳米材料、大蛋白质聚合体和生物囊泡。外泌体与巨噬细胞疾病的进展和对诊疗的反应可以通过外泌体的多组分分析来确定。

肺病细胞来源外泌体（LCC-exosome）可以通过刺激种瘤血管的形成来促进种瘤的生长。据相关报道称，LCC-exosome中的miR-210可以通过调节基质细胞中酪氨酸受体激酶A3的含量，促进种瘤血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a则可以通过开启脯氨酰羟化酶及压制紧密结合蛋白ZO-1来促进肺病的生血管作用。此外，有研究发现，外泌体中的内容物可以触发上皮-间质转化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌体波形蛋白表达增加，促使人正常支气管上皮细胞出现EMT，从而使肺支气管正常上皮细胞出现增殖，迁移能力。科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。

细胞摄取诊疗性外泌体：从树突状细胞、成纤维细胞和间充质细胞中分离出的诊疗性外泌体可对靶细胞产生特定的作用，包括新抗原呈递、免疫调节和药物有效载荷传递。诊疗性外泌体对靶细胞的影响可能是通过不同的进入或相互作用机制来控制的。完整的外泌体的进入可能包括受体介导的内吞作用、网格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞饮作用。外泌体内容物的进入或外泌体信号的诱导可能涉及配体受体诱导的细胞内信号或融合，从而将外泌体内容物沉积到细胞质中。近年来，随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及医学基础和免疫领域、寄生虫领域。外泌体普遍参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。

流式细胞技术针对外泌体的表面抗原标记物进行检测，能够实现外泌体的高通量、多通道分析。但是由于外泌体的粒径小、折射率低，所以采用常规的流式细胞仪进行检测时往往需要将外泌体与beads连接以增大表面积、增强反射，操作耗时又费力。Tian等搭建了一种高灵敏度的流式细胞仪(HSFCM)，将可检测的外泌体粒径降至40nm，能够在不连接beads的情况下实现每分钟10000个外泌体的检测，并且能够结合免疫荧光的方法进行外泌体标志蛋白质的定量检测，目前该仪器已商品化。NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。湖南外泌体摄取

外泌体的形成始于细胞内陷，成熟于多囊泡胞内体，终于膜融合。外泌体与巨噬细胞

透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）是用于评估外泌体形态、大小和表型的的两种常见的电子显微镜。SEM和TEM均使用电子束产生高分辨率的亚微米颗粒放大图像，以区分外泌体与残留在样品中相似大小的非外泌体颗粒，该方法还可用于检查样品的纯度。TEM与SEM之间的区别在于检测电子类别，在SEM中，电子与样品中的粒子相互作用时会发生散射，捕获并检测散射的电子，从而生成粒子图像。但是，在TEM中，不与粒子相互作用的电子穿过样品，并使用荧光屏进行检测。电子显微镜下外泌体大小不一，通常呈茶托样的圆形或椭圆形。采用电子显微镜检测外泌体时对样品的预处理和制备要求较高，外泌体的提取方法和品质会对电镜结果造成影响；另外样品的准备阶段比较复杂，不适合进行大量快速的测量；而且由于样本经过了干燥、固定以及冷冻等预处理和制备过程，对生物样本的结构会造成一定的破坏，从而影响观察的效果，无法准确测量外泌体浓度。安徽植物外泌体鉴定磁珠免疫法分离的外泌体，生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。外泌体与巨噬细胞

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