组织外泌体荧光标记

外泌体提取在短时间（一周之内）使用，可以放在4度保存，如果长时间保存可以放在-20度或-80度保存。也可以将外泌体进行分装，分别放在-20度或-80度。外泌体检测方法：外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。l、透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。2、纳米颗粒追踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。外泌体作为蛋白质的药物递送载体。组织外泌体荧光标记

外泌体研究背景：胞外囊泡是从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的具有双层膜结构的囊泡状小体，主要由微囊泡、凋亡小体、外泌体组成。而外泌体是其中一类小囊泡，直径为30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可携带核酸、蛋白质质和脂质等，存在于血液、唾液、尿液等多种体液中。越来越多的研究证实，外泌体可以通过细胞间转移核酸、蛋白质、脂质等特定物质，发挥特殊的功能。如在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、肿细胞细胞发生了发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。细菌提取试剂盒公司在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制。

NTA技术已被作为外泌体表征手段之一，相较于其他表征方式NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。大致方法是：将分离的外泌体样本注入纳米颗粒追踪分析仪，用激光光束穿过样本，激光在腔室内与颗粒相互作用时会发生散射，通过装有摄像头的显微镜收集散射光，捕捉外泌体的布朗运动，实现颗粒可视化。然后使用Stokes-Einstein方程来测量粒子的平均速度，继而估算粒子的大小。NTA能够测量粒径10-1000nm之间的颗粒，包含了外泌体50-150nm的径粒范围，但是NTA鉴定需要大于0.5毫升的样品体积以及优化的数据收集和分析参数，另外，NTA比较难区分与外泌体具有相似布朗运动的蛋白质聚集体，因此无法排除其他物质干扰。

AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器，将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内，根据称重精确测量流体体积，可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶，避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间，当达到设定的提取体积后，转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集，到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率，而且由于采用微滴计数的方法进行定量，可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值，对所测样品中的核酸分子进行一定定量。从研究上来讲并不太严格区分外泌体或微泡。外泌体是包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30–150nm)，由所有体外和体内细胞持续分泌。

外泌体的相关成分：1、外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋。外泌体发挥功能：将细胞或组织中多余的或者有害的分子排除，这为研究生物标志物提供了可能。细菌外泌体提取试剂盒价格

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细胞外囊泡是蛋白质、mRNA、miRNA和脂质运输来完成细胞间通讯通路的重要媒介，根据它们的大小和发生分为三类，包括外泌体、微泡和凋亡小体。其中，外泌体是直径大约为40-100nm的包装囊泡，由多种细胞分泌，内含有特定的蛋白质、脂质、细胞因子或遗传物质。来源于不同的组织的外泌体不只具有其特异性蛋白分子，而且还包含其行使功能的关键分子。近年来，随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及瘤子诊疗领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域；临床研究上已涉及心血管系统、内分泌代谢系统等。超速离心是目前分离外泌体的主要技术。组织外泌体荧光标记

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