对于铜绿假单胞菌的检测,前处理直接混匀制成待测样品或者采用滤膜过滤法进行处理。直接混匀测试揭开检测板上层膜,在检测板纸片上加1毫升直接混匀制成的待测样品,迅速贴好上层膜井水平晃动检测板,静置2分钟.滤膜过滤法处理揭开检测板上层膜,在检测板纸片,上加1毫升无菌水湿润后,迅速用无菌镊子将过滤水样的滤膜移放在检测板纸片上(滤膜截留细菌面向上),滤膜与纸片之间不要夹留着气泡,贴好上层膜。前处理25g(或25毫升)样品放入装有225毫升生理盐水的均质袋中,以8000r/分钟均质1~2分钟,制成1:10样品均液,根据样品污染程度及检验需要,可进一步制成10倍递增的样品稀释液。铜绿假单胞菌是一种常见的条件致病菌。薛瓦酵母菌种
葡萄球菌呈球形或椭圆形。直径约0.5--1μm。经常以葡萄串状排列,有时可能散在、成双、短链状存在。没有鞭毛、没有芽孢,体外培养一般不形成荚膜,在体内却可形成荚膜。革兰染色呈阳性。衰老、死亡、被吞噬细胞吞噬、青霉素等药物作用下,菌体可革兰染色阴性。葡萄球菌对营养要求不高,普通培养基生长良好。需氧或兼性厌氧。在18--40℃均可生长。耐盐性强。在含有10%氯化钠培养基中能生长,可用高盐培养基分离菌种。普通琼脂平板上形成圆形,表面光滑湿润,不透明菌落。典型菌株产生脂溶性的金黄色的色素而使菌落呈金黄色。在血琼脂平板上,因金黄色葡萄球菌能产生溶素,在菌落周围形成明显的透明溶血环。镰孢属金黄色葡萄球营养要求不高,在普通培养基上生长良好。
铜绿假单胞菌含有O抗原(菌体抗原)以及H抗原(鞭毛抗原)。O抗原包含两种成分:一种是其外膜蛋白,为保护性抗原;另一种是脂多糖,有特异性。O抗原可用以分型。铜绿假单胞菌的标本采集,分别来自不同影响部位的各种标本,包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。通过染色镜检,铜绿假单胞菌为革兰阴性杆菌,菌体大小(1.5~5.0)um×宽(0.5~1)um,细长且长短不一,有时呈球杆状或线状,成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛,无芽胞,无荚膜。
铜绿假单胞杆菌的模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55摄氏度左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性、退火、延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩增的目的基因扩增放大几百万倍。另外,铜绿假单胞杆菌的斜面菌种和冻干菌种应在2-8摄氏度保存。铜绿假单胞杆菌应采用冻结保存管宜采用塑料冷冻保存管,使用玻璃安瓿。金黄色葡萄球隶属于葡萄球菌属,可引起多种严重传染.有“嗜肉菌"的别称。
金黄色葡萄球菌的检验方法操作步骤:血浆凝固酶试验:吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL,放入小试管中,再加人培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤堵养物0.5mL,振荡摇匀,置36℃士1℃温箱或水浴内,每半小时观察一次,观察6h,如呈现凝固,即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块者,被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。直接计数方法6.2.1吸取上述1:10混悬液,进行10倍递次稀释,根据样品污染情况,选择不同浓度的稀释液1mL,分别加人三块Baird一Parker平板,每个平板接种量分别为0.3mL、0.3mL、0.4mL,然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分多不易吸收,可将平板放在36℃士1℃lh,等水分蒸发后反转平皿置36℃士1℃培养。金黄色葡萄球是有细胞壁的革兰阳性球菌,排列常是呈串的葡萄状,所以称作葡萄球菌。叶柄粘球菌菌种
大肠杆菌是革兰阴性杆菌,周身鞭毛,能运动,无芽孢。薛瓦酵母菌种
铜绿假单胞菌分解蛋白质能力甚强,而发酵糖类能力较低,分解葡萄糖,伯胶糖,单奶糖,甘露糖产酸不产气,不分解麦芽糖,菊糖和棉籽糖,甘露醇、乳糖及蔗糖,能液化明胶。分解尿素,不形成吲哚,氧化酶试验阳性,可利用枸椽酸盐。不产生H2S,MR试验和VP试验均为阴性。铜绿假单胞菌有菌体o抗原和鞭毛h抗原。一是o抗原含有内毒养素和原内毒养素蛋白质两种成份。原内毒养素蛋白质是一种高分子、低毒性,免疫原性强的保护性抗原,不只存在于不同血清型铜绿假单胞菌中,而且普遍存在于假单胞菌属的其他细菌以及肺炎杆菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等g-细菌中,是一种良好的交叉保护抗原。二是脂多糖,与特异性有密切关系。薛瓦酵母菌种
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