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医学实验外包,circRNA Pulldown(环状RNA)介绍:使用生物素RNA探针,与细胞裂解液孵育,形成探针-circRNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与裂解液中的其他成分分离。磁珠复合物洗脱后,可通过western blot实验或质谱实验检测特定的circRNA结合蛋白是否与circRNA相互作用。RNA pull-down实验就是先将RNA进行标记(如生物素探针标记),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-蛋白质复合物,之后再分离复合物得到蛋白质,通过western blot 或mass Spectrometry检测蛋白质的技术。目前RNA pull-down技术已成为研究miRNA、lncRNA与相互作用蛋白的主要技术手段之一。重庆医学医学实验外包实验室南京医学实验外包公司,胃溃疡模型。

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医学实验外包,分子机制研究,我们选好明星分子以后,调控层次就是要考虑的问题了,这里说的调控层次就是围绕中心法则展开对明星分子本身的探索,我们知道中心法则涉及到DNA-RNA-蛋白三个层面,根据调控的层次一般我们又分为转录水平和转录后水平,转录我们知道是发生在细胞核里面的。所以我们看到某个分子定位在细胞核时我们一般就从转录水平进行考虑,比如转录因子对DNA序列的结合,DNA甲基化、组蛋白修饰等等,而当RNA被转录出来后要经过加工过程,比如可变剪接,miRNA介导的降解,mRNA翻译成蛋白,蛋白合成后会被磷酸化修饰或者泛素化修饰从而***或者降解等等,这些是转录后的水平。那么我们在确定明星分子后,一般来说需要首先确定的是变化发生在哪个层面,是RNA还是蛋白,是蛋白的产生(翻译)、降解(比如泛素化)还是活化(比如磷酸化),从而把研究的焦点集中到明星分子的某个过程,这个层面是围绕一个明星分子的前世今生来展开的。

医学实验外包,明星分子选得好,文章分数才能高,中游节点**常选,上下连接左右逢源。明星分子的概念大而且含糊,尽管通路是一个大的网络,但是总体上上下游关系还是存在的,如果简单来划分可以分为上游,中游和下游三段,三者之间没有严格的界限,一般的通路常常出现分子类型有:配体与受体,激酶/磷酸酶(去/泛素化酶)与底物,转录因子和靶基因等,以TGFβ-Smad通路为例,如果把细胞膜和核膜作为上中下分类的区分点,可以粗略的这么划分和标注:那么在这个通路里面什么分子是明星分子呢?一般来说,大家选的重点集中在中游这个范围内,下游的分子(比如图中的p15)一般用来作为细胞表型(细胞周期)的证据,可能考虑到膜蛋白研究的复杂和困难性,大家也很少选择上游的分子,所以中游的分子就成了明星分子选择的重点了,特别是通路的名字叫做TGFβ-Smad,所以很多研究就是围绕Smad这个蛋白展开,比如Smad这个家族的蛋白即是转录因子,可以通过结合靶基因的DNA调控分子表达,其本身又可以被磷酸化发挥功能,所以又是激酶-底物这一关系中的底物这一角色,因此激酶-Smad-磷酸化的Smad(转录因子)-靶基因就成了一个信号轴。南京医学实验外包公司,含药血清制备。

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