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细胞转染的常用方法：磷酸钙共沉淀原理：该法可用于瞬时或稳定转染。然而因其对pH、温度和缓冲液盐浓度的微小变化十分敏感，所得结果容易出现差异，且对许多类型的细胞培养物(尤其是原代细胞)具有细胞毒性，转染效率较差。实验步骤：将核酸与氯化钙在磷酸盐缓冲液中混合，同时控制好pH、温度等条件 → 室温孵育，生成浓缩DNA的极小不溶性颗粒沉淀 → 将颗粒型沉淀分散到细胞中，促进DNA粘附在细胞表面 → 共沉淀通过内吞作用进入胞浆 → 分析细胞瞬时基因表达或者选择稳定性传染。细胞易于生长到高密度并合成更多蛋白。宁波细胞高效转染试剂厂家直销

细胞转染效率低下的几个大坑：1.不注意细节在转染之前更换一次37℃预温的培养基，可提高转染效率。脂质体和DNA/RNA混合物应当一滴一滴地滴下来，从培养皿一边滴到另一边，边滴边轻摇培养皿，以确保均匀分布和避免局部高浓度。这些都是一些细枝末节，但是，如果不注意的话，也会造成转染效率低下。2.细胞状态不好细胞状态不好，会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话，贴壁率应该在70-80%；如果是悬浮细胞的话，应该是6X105个/孔（24孔板），一般是转染前现在换液，转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。转染的整个过程都不应该有物品。重庆细胞高效转染试剂价格较适合转染的细胞是经过几次传代后达到对数生长期的细胞。

细胞转染实验简介：实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和细菌介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;细菌法是利用包装了外源基因的细菌传染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;细菌法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染 方法多采用脂质体法。

转染的注意事项：细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度较高的，CAT活性也较高。得到较高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的较佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异。果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。

细胞转染的原理、操作步骤以及小技巧：一、脂质体(Liposome)转染方法原理脂质体作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分普遍，中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。优点:与其它方法相比，有较高的效率和较好的重复性，它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下较方便的转染方法之一。表达水平与位臵无关，不会受到周围染色体元件的影响。重庆正规细胞高效转染试剂报价

瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA。宁波细胞高效转染试剂厂家直销

如何提高细胞转染实验效率：优化细胞生长状态密切观察您的细胞;确保它们状态良好。在开始转染细胞之前，先制定一个适当的种板方案，使细胞密度从转染开始到结束都保持较佳状态。增加成功几率—细胞是转染过程中的一个关键元素，它可以是影响结果的一致性和质量的较重要的变量。此外，还常用促有丝分裂刺激物(如，细菌转化，生长因子，条件培养基，以及滋养细胞)来活化原代培养细胞。贴壁细胞相比较悬浮细胞—在转染效率方面贴壁细胞和悬浮细胞之间的差异明显。天生趋于悬浮的细胞(如HL 60，Jurkat)非常难以转染。相反，天生为贴壁的细胞(如HEK，CHO)则可适应悬浮生长的条件。宁波细胞高效转染试剂厂家直销

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