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细胞转染之PEI 转染法：1.细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以 1×105 至 4×105细胞/cm2 的密度平铺细胞于 35 mm 培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占面积达到培养皿总面积的 70－90％）。将细胞置于含 5％CO2 的 37℃温箱中孵育 8-24 h，当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前 2 h 换液（用 1.5 ml 无血清培养基置换旧的培养基）。注：PEI转染法对细胞生长有克制作用，在换液前细胞几乎不生长，所以需要密度比较大时做转染。2.制备PEI-DNA 混合物以 35 mm 组织培养皿用 240 μl 反应总体积为例。先在无菌EP管中加入120 μl 1×HBS,再加入质粒 DNA（总量 1-3 μg 为佳），混匀后加入等体积 PEI工作液，充分混匀后室温静置 20-30 min ，较后将这 240 μl 的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中，轻轻摇动平皿混匀后置于含 5％ CO2的 37℃温箱孵育。一般的瞬时转染 方法多采用脂质体法。武汉细胞高效转染试剂平均价格

转染效率：线型PEI(LinePEI,LPEI)与其衍生物用作基因转染载体的研究比分枝状PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些，过去的研究认为在不考虑具体条件，LPEI/DNA转染复合物的细胞毒性较低，有利于细胞定位，因此与BPEI相比应该转染效率高一些。但较近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的转染复合物，从而提高转染效率，但同时细胞毒性也增大。超很高枝的、较柔性的PEI衍生物含有额外的仲胺基和叔胺基，在染实验中发现这种PEI的毒性低，但转染效率却较高。GenEscort是采用各种分枝状和超很高枝状的小分子PEI与各种含有生理条件下可降解键的交联剂交联，合成出的一系列很高枝的可降解的PEI衍生物。聚合物的分枝结构使得其具有较高的正电性，因此易于高效地包裹各种DNA、RNA分子及质粒形成小的纳米颗粒，从而提高转染效率，当所形成复合物进入细胞以后，其中所含的生理条件下可降解的化学键在细胞内水解，使交联聚合物分解为无细胞毒性的小分子PEI，这样结构的转染试剂在体外应用可以获得高的转染效率和低的细胞毒性，其可降解性对体内应用也具有重要的意义。无锡正规细胞高效转染试剂哪家好转化、转染、转导几个名词是从事生命科学研究的初学者经常碰到的。

细胞转染：(1)转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存，使用前还需震荡，。(2)选择合适的混合比例(1：1-1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。(3)将混合液在室温放置10—15分钟。(4)吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。(5)加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。(6)到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24-48小时。

转染的注意事项：用于蛋白生产的细胞的转染可以在添加有血清或无血清培养基中进行。但更倾向于使用无血清培养基表达蛋白，因为血清蛋白会干扰下游表达蛋白的纯化。无血清培养基一般针对某一特定细胞类型优化并有几类无血清培养基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培养基低得多）。无蛋白培养基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化学成分的培养基不含有蛋白或未知组成的成分。多种多样的配方使您可以选择较适合您应用的一种。在含血清时转染的细胞可以适应无血清培养基，无蛋白培养基或限定化学成分的培养基。在部分情况下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），对于已适应无血清或无蛋白培养基的细胞，可以使用其培养基进行转染。其他一些无血清培养基包含克制阴离子脂质体介导转染的成分，在这些情况下，有必要在诸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培养基中进行培养和转染。重新接种于培养皿或瓶，较好在转染前4小时换一次新鲜培养液。

转染的注意事项：细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度较高的，CAT活性也较高。得到较高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的较佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异。瞬时表达分析检测未重组质粒DNA上基因的表达。广州正规细胞高效转染试剂厂家供应

直到外源基因在细胞分裂过程中因各种因素丢失为止。武汉细胞高效转染试剂平均价格

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